ELISA的原理和类型

【资料简介】

ELISA的原理和类型

ELISA的类型

    双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法，操作步骤如下：

1) 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

2) 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

3) 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。

   在临床检修中，此法合用于检修各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步法检测。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。

ELISA的原理

    ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既留存其免疫学活性，又留存酶的活性。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。因为酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。