罗丹明123 简易细胞核外形态染色试剂盒 产品说明书

【资料简介】

罗丹明123 简易细胞核外形态染色试剂盒
产品说明书
主要用途
罗丹明123 简易细胞核外形态染色试剂是一种旨在通过荧光染料罗丹明123 快速集聚在细胞核周围的活体
线粒体，呈现黄绿色，用于分析和观察细胞核外围形态的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、
成功实验证明的。其适用于各种细胞核外或线粒体形态（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。产品严格
无菌，即到即用，荧光清晰，操作简捷，性能稳定。
技术背景
线粒体是细胞中重要的细胞器，大量存在于代谢旺盛的细胞中，分布在细胞核周围。线粒体标记荧光探针
罗丹明123（Rhodamine123），是一种膜电位敏感的阳离子荧光染料，可以自由进入细胞，高度选择性地聚
集在线粒体。在活细胞状态下直接染色，借助480nm 或500nm 激发波长可以清晰看到被染成黄绿色的线状
或颗粒小体的线粒体，分布在细胞核周围。
产品内容
染色液（Reagent A） 微升
产品说明书1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证6 月
用户自备
磷酸缓冲液：用于清洗样品
微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作
盖玻片：用于染色后封片
荧光显微镜：用于观察细胞核DNA 染色
实验步骤
一、贴壁细胞染色
1． 准备1 个细胞培养48 孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％
2． （注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和其它培养孔板，见注意事项5）
3． 小心抽去细胞培养液
4． 轻轻沿着孔壁加入500 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
5． 小心抽去1 毫升磷酸缓冲盐溶液（PBS）
6． 小心加入100 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），覆盖培养孔表面
2
7． 小心加入xx 微升染色液（Reagent A）
8． 轻轻摇动培养板，使其混匀
9． 室温下孵育60 分钟，避免光照（或37℃培养箱里孵育15 分钟）
10．小心抽掉染色液
11．小心加入200 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），覆盖培养孔表面
12．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：
二、悬浮细胞染色
1． 将悬浮细胞（1 X 106 细胞）移入到1.5 毫升离心管
2． 放进微型台式离心机离心10 分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3． 小心抽掉上清液
4． 加入500 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀细胞颗粒群
5． 放进微型台式离心机离心10 分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽掉上清液
7． 加入100 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀细胞颗粒群
8． 加入xx 微升染色液（Reagent A），混匀
9． 室温下孵育60 分钟，避免光照（或37℃培养箱里孵育15 分钟）
10．放进微型台式离心机离心10 分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
11．小心抽掉上清液
12．加入100 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀细胞颗粒群
13．移出5 微升到载玻片上，放上盖玻片
14．即刻在荧光显微镜下进行观察：
15．或即刻进行细胞流式仪分析：
注意事项
1． 本产品为100 次操作
2． 本产品友好使用于双重染色或重叠染色
3． 操作时须戴手套
4． 操作时，避免污染母液
5． 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和各种培养孔板，须相应
调整试剂溶液：
操作容器试剂溶液规格
载玻片100 微升
载玻片培养皿100 微升
35mm 培养皿500 微升
96 孔培养板50 微升
48 孔培养板100 微升
24 孔培养板200 微升
12 孔培养板400 微升
6 孔培养板500 微升
25cm2 细胞培养瓶1 毫升
6． 本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色
7． 如果染色固定后的细胞，室温下孵育时间15 分钟
8． 孵育时，须避免光照
9． 建议细胞染色完成后，即刻进行分析，不宜超过2 小时
10．细胞流式仪分析前，须混匀内容物
11．细胞流式仪分析，细胞检测量不得少于10000 个
12．本公司提供系列简易细胞核染色分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰