人抗子宫内膜抗体（EMAb）ELISA试剂盒使用方法

【资料简介】

检测范围：                                                          96T

150pg/ml-4000pg/ml

 

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗子宫内膜抗体（EMAb）含量。

实验原理

       本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗子宫内膜抗体（EMAb）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗子宫内膜抗体，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗子宫内膜抗原呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗子宫内膜抗体（EMAb）浓度。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	6ml×1瓶
2	酶标试剂	6ml×1瓶	8	标准品（8000pg/ml）	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×8条	9	标准品稀释液	1.5ml×1瓶
4	样品稀释液	6ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

• 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

4000pg/ml	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
2000pg/ml	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
1000pg/ml	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
500pg/ml	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
250pg/ml	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

• 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
• 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
• 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
• 温育：操作同3。
• 洗涤：操作同5。
• 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
• 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
• 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。