大鼠环磷酸鸟苷ELISA试剂盒使用说明书

【资料简介】

大鼠环磷酸鸟苷ELISA试剂盒使用说明书

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中cGMP水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入cGMP抗原、化的抗大鼠cGMP抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的cGMP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

.酶联板：一块（96孔）

标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至ml，盖好后静置0分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为00ng/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成00ng/mL，50ng/mL，25ng/mL，2.5ng/mL，6.25ng/mL，3.ng/mL，.56ng/mL，其原液直接作为zui高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL，临用前5分钟内配制。

如配制50ng/mL标准品：取0.5ml00ng/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

2.样品稀释液：×20ml/瓶。

3.检测稀释液A：×0ml/瓶。

4.检测稀释液B：×0ml/瓶。

5.检测溶液A：×20ul/瓶（：00）临用前以检测稀释液A：00稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔00ul），实际配制时应多配制0.-0.2ml。如ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

6.检测溶液B：×20ul/瓶（：00）临用前以检测稀释液B：00稀释。稀释方法同检测溶液A。

7.底物溶液：×0ml/瓶。

8.浓洗涤液：×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

9.终止液：×0ml/瓶（2NH2SO4）。

标本的采集及保存

．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C000xg离心5分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤

各试剂在使用前平衡至室温。

.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品00ul，注意不要有气泡，轻轻混匀，酶标板加上盖，37℃反应20分钟。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。

3.每孔加检测溶液A工作液00ul，37℃,60分钟。洗板3次，350ul/每孔，甩干。

4.每孔加检测溶液B工作液00ul，37℃，60分钟，洗板5次，甩干。

5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟（此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显）。

6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时兰色立转黄色）。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
注意事项

．洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

2．一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

3．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

4．如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

6．底物请避光保存。

检测范围：

.56ng/mL-00ng/mL

说明

．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．有效期：6个月

3．浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

5．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。