猪弓形虫 （Tox）酶联免疫分析试剂盒使用说明

【资料简介】

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中弓形虫 (Tox)含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中人弓形虫 (Tox)水平。用纯化的猪弓形虫 (Tox)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的弓形虫 (Tox)标准品和未知浓度的弓形虫 (Tox)待检样品，温育后，加入*标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的弓形虫 (Tox)抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪弓形虫 (Tox)浓度。

试剂盒组成 

1	20倍浓缩洗涤液	50ml×1瓶	9	标准品S1（16U/L）	0.5ml×1瓶
2	链霉亲和素-HRP	6ml×1瓶		标准品S2（8U/L）	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×8条		标准品S3（4U/L）	0.5ml×1瓶
4	*标记的抗-IgG抗体	6ml×1瓶		标准品S4（2U/L）	0.5ml×1瓶
5	显色剂A液	6ml×1瓶		标准品S5（1U/L）	0.5ml×1瓶
6	显色剂B液	6ml×1/瓶	10	密封袋	1个
7	终止液	6ml×1瓶	11	封板膜	3张
8	样品稀释液	6ml×1瓶	12	说明书	1份

 

标本要求 

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

• 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
• 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl（样品zui终稀释度为5倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
• 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。
• 加*标记的抗-IgG抗体：每孔加入*标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟
• 洗涤：操作同4。
• 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
• 洗涤：操作同4。
• 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
• 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
• 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。