大鼠心肌营养素（CT）elisa试剂盒使用说明书

【资料简介】

大鼠心肌营养素(CT)elisa试剂盒使用说明书

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心法：抗大鼠心肌营养素(CT)单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的心肌营养素(CT)会与单抗结合，游离的成份被洗去。加入酶标抗体，抗大鼠心肌营养素(CT)抗体与结合在单抗上的大鼠心肌营养素(CT)结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，若反应孔中有心肌营养素(CT)，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测OD值，心肌营养素(CT)浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的心肌营养素(CT)浓度。

操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 00μL，余孔分别加标准品或待测样品 00μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入化抗体工作液 00μL（在使用前5 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 小时。
3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 -2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 5 分钟内配制）00μL，加上覆膜，37℃温育30 分钟。
5. 弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，方法同步骤3。
6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜37℃避光孵育5 分钟左右（根据实际显**况酌情缩短或延长，但不可超过30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。
注意事项：
◆ 仔细阅读说明书。
◆ 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期，请勿使用。
◆ 按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）。
◆ 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存。
◆ 准备好所有实验额外所需物品，（比如移液器，试管，清洗器，酶标仪）。
◆ 按说明书将所用试剂平衡至室温，根据检测标本数量确定所需试剂的量。
◆ 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件，保证所有试剂均按照试剂盒内说明书的条件存储。
◆ 检查不稳定或者变质的试剂溶液（比如沉淀或变色）。有些试剂，比如标准品稀释液或者检测稀释液，可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前，必需充分混匀。而由于沉淀物的特性，在加入酶标板之前，必需不停搅拌。
◆ 保证充分的孵育时间和温度。
◆ 切勿使用不同批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液时，避免泡沫产生。
◆ 在实验开始之前，安排好实验流程。
◆ 在实验开始之前，清洁工作台。
◆ 若有问题，应与我公司或代理商的  
结果判断:
. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 使用专业的曲线制作软件，如curve expert .3或.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。