琼脂糖凝胶4B sapharose 4B 使用说明介绍

【资料简介】

点击次数：18 发布时间：2010-11-24 20:46:10

 

琼脂糖凝胶4B产品说明书

琼脂糖凝胶4B是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。

1. 外观

本品为乳白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

2. 理化指标

项       目	指       标
基质	4%琼脂糖凝胶
排阻极限	60000~20×106 （球蛋白）
形状	球型
粒径	45~165 μm
zui高流速	70-140 cm/h*
耐压	0.03 MPa
耐热	pH7水中45℃24h
pH适用范围	4~9 （长时间）, 3~11（短时间，在位清洗）
化学稳定性	可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍

 *检测条件： 层析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl

3. 包装

产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、” 等内容。

4. 贮存

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

5. 注意事项

本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中

6.运输

运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

7.保质期

5年。

8.应用

本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。下面简要介绍介质的使用过程。

8.1 装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。

以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

 ⑵选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。不要剧烈搅动，以免搅坏微球。

⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

⑷  用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液缓慢流过，使柱床稳定。

⑹用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

8.2平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

8.3上样

⑴样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

⑵介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

⑶上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

8.4洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

8.5再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

8.6注意：在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。

 

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