Elisa样本处理方法

【资料简介】

样品前处理

脑组织

1.  聚集的Aβ（阿滋海默症病人的脑组织）

①1g脑组织切碎后加5倍体积的TBS，用均质器均质（10次）。 组织匀浆500000×g，4℃离心20分钟。

TBS：50 mmol/L Tris-HCl ,  pH 7.6, 150 mmol/L NaCl ,  蛋白酶抑制剂 [0.1 mmol/L 二异丙基氟磷酸盐 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮盐酸盐, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]

②沉淀物悬浮与5倍体积的TBA/蛋白酶抑制剂（含1 mol/L蔗糖），500000×g，4℃离心20分钟。

③沉淀物中加入3倍体积的1％Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制剂，匀质（10次）。37℃孵育15分钟后，500000×g离心20分钟。

④沉淀物和匀质物中加入3倍体积的2％SDS/TBS/蛋白酶抑制剂到。组织匀浆37℃孵育15分钟后，500000×g 25℃离心。

⑤沉淀物中加1mL 70％蚁酸到，超声破碎后500000×g 4℃离心

⑥收集上清液并用离心浓缩（Speed Vac）干燥。加100μL DMSO并短时超声破碎成悬液。零下80℃储存这个DMSO－蚁酸溶解的Aβ溶液直到使用。

⑦检测时，依照说明书所写，用试剂盒中的标准稀释液溶解样本。推荐稀释度是Aβ40稀释1,000倍，Aβ42稀释100倍。

2. 可溶Aβ（正常脑组织）

2-1. 使用70％蚁酸

①150mg组织加入1mL 70％蚁酸中匀质（敲6次）后100,000×g离心1小时。

②用1 mol/L Tris二十倍稀释上清液

③用试剂盒中的标准稀释液稀释样品后，按照说明书所述方法检测。

2-2. 使用5.0 mol/L盐酸胍

①组织加入10倍体积预冷的L盐酸胍溶液（5.0 mol/L / 50 mmol/L Tris-Cl, pH8.0）后匀质，室温下3～4小时。

②组织匀浆中加入10倍体积的预冷酪蛋白缓冲剂（0.25%干酪素/  0.05% */ 20μg/ml*/ 5 mmol/l EDTA, pH8.0 / 10μg/mL亮肽素，溶于PBS），16,000×g，4℃离心20分钟。

③用试剂盒中的标准稀释液稀释上清液后，按照说明书所述方法检测。

细胞培养上清液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是Aβ40稀释5倍，Aβ42无需稀释。

脑脊液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是50倍。

血浆

①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。

②用试剂盒中的标准稀释液4倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测，按照说明书方法检测。