上海研生生化试剂有限公司

荧光抗体染色间接法

时间:2015-7-13阅读:572
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间接法

(1)切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃ 作用 30 min。然后用 0.01mol/l pH7.2PBS 洗两次,10 min,用吸水吸去或吹干余留的液体。

(2)再滴加间接荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色 30 min,37℃,缓冲盐水洗两次 10 min,搅拌,缓冲甘油封固,镜检。

对照染色:①抗体对照:用正常兔血清或人血清代替免疫血清,再用上法进行染色,结果应为阴性。②抗原对照:即类属抗原染色,亦应为阴性。③阳性对照。

间接法中上述方法称双层法(Double Layer Method)。另一种称夹心法,即用未标记的特异性抗原加在切片上先与组织中之相应抗体结合,再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上,而间接地显示出组织和细胞中抗体的存在,方法步骤如下:

①切片或涂片固定后,置于染色湿盒内。

②滴加未标记的特异性抗原作用切片于 37℃,30 min。

③缓冲盐水洗 2 次,每次 5 min,吹干。

④滴加特异性荧光抗体再用切片于 37℃,30 min。

⑤如③水洗。

⑥缓冲甘油封固,镜检。

间接法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原,敏感性较高,操作方法较易掌握,而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体(如麻疹)等的研究和检查,所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。

英文名称 Homo sapiens (Human) 核纤层蛋白B1(LMNB1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Rattus norvegicus (Rat) 核纤层蛋白A/C(LMNA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 核纤层蛋白A/C(LMNA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Mus musculus (Mouse) 核纤层蛋白A/C(LMNA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 核糖体结合糖蛋白Ⅱ(RPN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 核糖体结合糖蛋白Ⅰ(RPN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
抗体英文名称 Homo sapiens (Human) 核糖体蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 核糖体蛋白L6(RPL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 核糖体蛋白L23A(RPL23A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T

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