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整合型酵母载体
整合型酵母质粒(YIp)是细菌质粒含有一个酵母基因。如YIp5,是在pBR32的基础上插入了一个URA3基因,这个基因编码乳清酸核苷 5′磷酸脱羧酶,是嘧啶合成中的一个酶,可以作为选择标记,选择的方法与LEU2标记相同,YIp不能像质粒一样复制,其复制依赖于整合到酵母的染色体上,整合的机制与YEp相同。ELISA试剂盒
复制型酵母载体
复制型酵母质粒(YRp)含有一段包括起始位点在内的染色体DNA,可以作为独立质粒进行复制。复制起始位点与多个酵母基因距离很近,包括作为选择标记的基因。为这种载体提供复制起点的是2μmDNA环或自主复制序列(autonomouslyreplicatingsequence,ARS)。YRp7是其中的一种,它由pBR322与酵母基因TRP1组成,TRP1参与*的合成,它与起始位点的距离非常近,插入YRp7的酵母DNA片段包括TRP1和复制起始位点。在一个特定的克隆实验中选用哪一种类型的质粒需要考虑三个因素。ELISA试剂盒
(1)转化频率也就是每微克的质粒DNA可以获得转化子的数目。YEp的转化频率zui高,每微克DNA可以获得10000~100000个转化细胞;YRp次之,可以产生1000~10000个转化细胞;YIp产量较低,一般少于1000个,如果不是用特殊的程序,只能产生1~10个重组子。较低的转化效率意味着与染色体之间的重组是非常少的。
(2)拷贝数YEp和YRp含有的拷贝数zui多,每个细胞中含有20~50和5~100个,而YIp一般只以单个拷贝存在于细胞中。如果要从克隆的基因中获得蛋白,这些特性就非常重要,因为拷贝数越多,蛋白质的产量就越高。
(3)稳定性YIp能产生稳定的重组子。而YRp重组子是非常不稳定的,母细胞中聚集大量的重组分子,但在子代中就可能丢失。YEp也有同样的问题。ELISA试剂盒
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