星形胶质的培养

    星形胶质细胞在中枢神经系统中发挥着多种作用，组成血脑脊液屏障，营养和支持神经元，与神经元突触的发生有着密切。

1．材料

(1)材料来源：新生1周内大鼠的脑组织。

(2)手术器械：解剖剪、解剖镊、眼科剪和*。

(3)培养瓶或培养皿：用O．01％PLL涂布底壁，备用。

(4)清洗液：HBSS。

(5)消化液：O．05％*。

(6)培养液：DMEM和F12(1：1，V／V)混合培养液，添加15％FBS、6g／L葡萄糖、10万I U／L*和100mg／L，*。

2．方法

(1)取材：在无菌条件下，通过颈动脉放血处死动物，分离出大鼠大脑皮质。用预冷的HBSS冲洗3次后，在解剖显微镜下*剔除脑膜和表面血管。将皮质剪成1mm3左右的小块。

(2)消化：剪碎后加入O．05％*，将组织块放37℃水浴中振荡消化30min。然后，加入培养液，终止消化，用吸管轻轻吹打，离心(1000r／min，10min)。

(3)细胞悬液制备：吸去上清液，加入新鲜培养液．然后用吸管轻轻吹打至组织块消散。调整细胞浓度至O．5×106个／ml，将细胞接种于培养瓶中．培养：30min。翻转培养瓶，吸出瓶中含未贴壁细胞的培养液，用100目滤器过滤，将滤液离心(1000r／min，10min)。

(4)培养细胞：吸去上清液，用培养液悬浮沉淀细胞，将细胞接种于培养瓶中，放培养箱中静置培养。3d后换培养液，以后每隔2～3d换液1次。培养9～lOd。当细胞分层生长时，将培养瓶放入恒温水浴振荡器内，在37℃条件下螺旋水平振荡15～18h。吸去悬液，剩余的贴壁细胞即为星形胶质细胞。然后，进行传代培养。

3．结果观察培养4h后，可见细胞长出细小突起。培养3～5d后，细胞数目增多，星形胶质细胞的比例逐渐增大。9～10d后，细胞长满瓶壁，细胞分层生长，星形胶质细胞贴于底壁，少突胶质细胞位于星形胶质细胞层上面。经振荡纯化后，少突胶质细胞脱落，得到贴壁的星形胶质细胞。可用抗胶质原纤维性蛋白免疫细胞化学方法染色鉴定星形胶质细胞。

4．注意事项应注意振荡时间，以保证星形胶质细胞与少突胶质细胞的分离。