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髓过氧化物酶（MPO）是中性粒细胞和单核细胞中含量zui高的一种绿色血红蛋白，具有过氧化物酶活性。它催化过氧化氢和卤离子反应形成细胞毒酸和其他中间体。并在依赖氧的杀死肿瘤细胞和微生物中发挥重要作用。MPO缺乏症是该酶的一种遗传性缺陷，易患免疫缺陷。对治疗性MPO抑制剂的开发有相当大的兴趣。我们的Amplite™髓过氧化物酶测定试剂盒提供了一种快速，灵敏的方法来测定溶液和细胞裂解物中的髓过氧化物酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松实现自动化。该套件使用我们的Amplite™Red底材，可实现双重记录模式。信号可以通过荧光酶标仪或吸光度酶标仪轻松读取。使用Amplite™髓过氧化物酶测定试剂盒，在100 µL反应体积中，我们仅检测到0.1 mU / ml髓过氧化物酶。该试剂盒可以自动化进行MPO抑制剂的高通量筛选。
| 荧光酶标仪 | |
| 激发 | 540纳米 |
| 发射 | 590纳米 |
| 隔断 | 570纳米 |
| 推荐板 | 纯黑色 |
组件
| 成分A：Amplite™红色（光敏） | 1个小瓶 |
| 组分B：测定缓冲液 | 1瓶（20毫升） |
| 成分C：H2O2 | 1小瓶（100 µL，3％） |
| 成分D：髓过氧化物酶标准品 | 1小瓶（10 mU，冻干） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
MPO标准品或测试样品（50 µL）
添加MPO工作溶液（50 µL）
在室温下孵育30-60分钟
在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）
重要说明
在开始实验之前，将所有套件组件解冻至室温。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. Amplite™Red储备液（250X）：
将40 µL DMSO（组分E）添加到Amplite™Red底物（组分A）的小瓶中。储备溶液应及时使用。注意：在硫醇（例如二硫苏糖醇（DTT））存在下，Amplite™Red底物不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7 – 8下进行。建议使用提供的测定缓冲液pH 7.4。
2. H 2 O 2储备溶液（500X，10 mM）：
将10 µL的3％H 2 O 2（0.88M，组分C）添加到870 µL的测定缓冲液（组分B）中。注意：稀释的H 2 O 2溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。
3.髓过氧化物酶（MPO）标准溶液（200 mU / mL）：
将50 µL测定缓冲液（组分B）加入到瓶中。注意：一个小瓶包含大约5-10 mU髓过氧化物酶。
配制标准溶液
为了方便起见，请使用我们的系列稀释计
将20 µL的200 mU / mL MPO标准溶液添加到380 µL的测定缓冲液（组分B）中，以获得10 mU / mL的MPO标准溶液（MPO7）。取10 mU / mL MPO标准溶液进行1：3的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的MPO标准液（MPO6- MPO1）。
准备工作溶液
将20μLAmplite™红色储备溶液（250X）和10μLH 2 O 2（500X）加入5 mL的测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03 mL MPO工作溶液。避光。
程序
表1.在96孔黑色实心微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。MPO =髓过氧化物酶标准品（MPO1- MPO7，0.01至10 mU / mL）; BL =空白控件；TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| MPO1 | MPO1 | ... | ... |
| MPO2 | MPO2 | ... | ... |
| MPO3 | MPO3 | ||
| MPO4 | MPO4 | ||
| MPO5 | MPO5 | ||
| MPO6 | MPO6 | ||
| MPO7 | MPO7 |
表2. 每个孔的试剂组成。请注意，由于Amplite™Red底物过度氧化（变成非荧光产物），高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。
| 好 | 体积 | 试剂 |
| MPO1-MPO7 | 50微升 | 连续稀释（0.01至10 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析缓冲液（组分B） |
| TS | 50微升 | 测试样本 |
根据表1和2中提供的布局，准备髓过氧化物酶标准品（MPO），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
将50 µL MPO工作溶液添加到髓过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总MPO测定体积为100 µL /孔。对于384孔板，将25 µL MPO工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
在避光条件下，室温下将反应孵育30至60分钟。
使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570 nm）下监控荧光强度。注意：该板的内容物也可以转移到白色的透明底板上，并通过吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读取。与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。
11301 Amplite™荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 *红色荧光* Amplite™ Fluorimetric Myeloperoxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11302 Amplite™荧光法guansuan氧化酶检测试剂盒 *红色荧光* Amplite™ Fluorimetric Glutamate Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11303 Amplite™荧光法单胺氧化酶检测试剂盒 *红色荧光* Amplite™ Fluorimetric Monoamine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11304 Amplite™荧光法huangpiaoling氧化酶检测试剂盒 *红色荧光* Amplite™ Fluorimetric Xanthine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
