guansuan氧化酶属于氧化还原酶家族，特别是那些以氧为受体作用于供体的CH-NH2基团的酶。它是一种酶，可在水和氧气存在下特异性催化L-guansuan的氧化脱氨反应，并生成邻-酮戊二酸，氨和过氧化氢。Amplite™荧光

guansuan氧化酶测定试剂盒提供了一种快速，超灵敏的方法，用于测量溶液和细胞裂解物中的guansuan氧化酶。在该测定中，L-guansuan被guansuan氧化酶氧化为β-酮戊二酸，NH 3和H 2 O 2。反应中包含L-bingansuan和L-guansuan-丙酮酸转氨酶，导致多个循环的初始反应，从而显着放大了H2O2的产生。该套件使用我们的Amplite™Red底材，可实现双重记录模式。荧光信号可通过荧光酶标仪或吸光度酶标仪轻松读取。借助Amplite™guansuan氧化酶测定试剂盒，我们在100 µL反应体积中检测到低至40 µU / mL的guansuan氧化酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松实现自动化。

1. 氧化酶标准品或测试样品（50 µL）

2. guansuan

3. 加入氧化酶工作溶液（50 µL）

4. guansuan

5. 在室温下孵育30-60分钟

6. 在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

重要说明
在开始实验之前，将所有套件组件解冻至室温。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Amplite™Red储备液（250X）：
将40 µL DMSO（组分F）添加到Amplite™Red（组分A）小瓶中。储备溶液应及时使用。注意：Amplite™Red在存在硫醇（如二硫苏糖醇（DTT）的情况下不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的测定缓冲液pH 7.4。

2. HRP储备溶液（400X）：
将200 µL测定缓冲液（组分B）加到辣根过氧化物酶（组分C）小瓶中。

3.guansuan储备溶液（400X）：
将1.0 mL ddH ₂ O加入小瓶guansuan（组分D）中，制成400Xguansuan储备溶液。

4.guansuan氧化酶（GO）标准溶液（150 mU / mL）：
将100 µL测定缓冲液（组分B）添加到小瓶guansuan氧化酶标准液（冻干，组分E）中，制成150 mU / mLguansuan氧化酶（GO）标准溶液。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

将30 µL的150 mU / mL GO标准溶液添加到420 µL的测定缓冲液（组分B）中，以获得10 mU / mL的GO标准溶液（GO7）。取10 mU / mL的GO标准溶液进行1：3的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的GO标准液（GO6- GO1）。

准备工作溶液

将20μL的Amplite™Red储备液（250X），12.5μL的HRP储备液（400X）和12.5μL的guansuan储备液（400X）加入5 mL的测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mLguansuan氧化酶工作液（GO工作液）。避光。

程序

表1.黑色标准96孔微孔板中GO标准品和测试样品的布局。GO =guansuan氧化酶标准品（GO1-GO7，0.01至10 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.  每个孔的试剂组成。较高浓度的GO可能会由于Amplite™Red（过度生成非荧光产品）的过度氧化而导致荧光信号减弱。

1. 根据表1和表2提供的布局，准备GO标准液（GO），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。
   

2. 在GO标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL GO工作溶液，以使GO测定总体积为100 µL /孔。对于384孔板，将25 µL GO工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
   

3. 在避光条件下，室温下将反应孵育30至60分钟。
   

4. 使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm），截止= 570 nm时监控荧光强度。注意：该板的内容物也可以转移到白色的透明底板上，并通过吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读取。与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。

数据分析

1e+4100010010.1- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™Glutamate Oxidase (mU/mL)RFUX: 0.1768Hover mouse to interactY: 526.58Y: 526.58

从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。该方程式可用于计算guansuan氧化酶样品。我们建议您使用在线线性回归计算器，