快速进行乙醇定量测量的能力在生命科学研究，临床评估以及食品和药品行业中非常需要。此非放射性乙醇测定法基于乙醇被氧化酶氧化的乙醇。该套件使用我们的Amplite™Red，使该套件可在荧光或比色读数的双重模式下记录。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案。该测定法坚固耐用，灵敏，并且可以轻松适用于需要测量乙醇的多种应用中的高通量测定法。该测定可以在30分钟内完成。

1. 准备乙醇标准品或测试样品（50 µL）

2. 加入乙醇工作溶液（50 µL）

3. 在室温下孵育5-30分钟

4. 监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光强度

重要说明
在开始实验之前，将所有套件组件解冻至室温。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Amplite™乙醇试剂储备溶液（250X）：
将40 µL DMSO（组分D）添加到Amplite™乙醇试剂（组分A）小瓶中，制成250X Amplite™乙醇试剂储备溶液。储备溶液应及时使用。注意：Amplite™乙醇试剂在存在硫醇（例如（DTT））的情况下不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™乙醇试剂在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7 – 8下进行。建议使用提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

2.乙醇酶混合物（100X）：
将100 µL的测定缓冲液（组分B）添加到小瓶乙醇酶混合物（组分C）中，并充分混合以制成100X乙醇酶混合物。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

通过将适量的乙醇标准品（组分E）稀释到H ₂ O中以制备浓度为0％至0.1％的乙醇来制备乙醇标准品。包括0％的乙醇对照作为空白对照。乙醇的zui终浓度应低两倍（即0％至0.05％）。

准备工作溶液

将20μL250X Amplite™乙醇试剂储备溶液和50μL100X乙醇酶混合液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，制成乙醇工作溶液。

程序

表1.  固体黑色96孔微孔板中的乙醇标准品和测试样品的布局。ES =乙醇标准品（ES1-ES7，0.0001％至0.1％），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.  每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和2中提供的布局，准备乙醇标准品（ES），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。注意：由于Amplite™乙醇试剂过度氧化（变成非荧光产品），高浓度乙醇（例如终浓度0.5％）可能会导致荧光信号降低。
   

2. 将50 µL乙醇工作溶液添加到乙醇标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使乙醇总测定体积为100 µL /孔。对于384孔板，向每个孔中添加25 µL乙醇工作溶液，总体积为50 µL /孔。
   

3. 在避光条件下，于室温下孵育反应5至30分钟。
   

4. 使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm），截止= 570 nm时监控荧光强度。注意：该板的内容物也可以转移到白色的透明底板上，并通过吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读取。与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。

   40001	Amplite™乙醇定量试剂盒	Amplite™ Ethanol Quantitation Kit	1 kit
   40004	Amplite™比色法葡萄糖定量试剂盒	Amplite™ Colorimetric Glucose Quantitation Kit	500 Tests
   40005	Amplite™荧光法葡萄糖定量试剂盒	Amplite™ Fluorimetric Glucose Quantitation Kit	500 Tests
   40006	Amplite™danguchun定量试剂盒	Amplite™ Cholesterol Quantitation Kit	1 kit
   40007	Amplite™danjian定量试剂盒	Amplite™ Choline Quantitation Kit	1 kit