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葡萄糖是一种单糖，是生物学中zui重要的碳水化合物。它是细胞生长的能量和代谢中间体。葡萄糖是光合作用的主要产物之一，在原核生物和真核生物中都开始细胞呼吸。葡萄糖水平是许多代谢紊乱的关键诊断参数。该葡萄糖测定试剂盒提供了一种快速而灵敏的方法来测量各种生物样品（例如血清，血浆，体液，食物，生长培养基等）中的葡萄糖。该试剂盒使用了我们的Amplite™Red底物，使该试剂盒可通过荧光或比色读数双重记录。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案。该测定是可靠的，并且可以很容易地应用于需要测量葡萄糖的多种应用中的高通量分析。例如，该测定法可能适合于监测蛋白质表达过程中发酵和葡萄糖进料期间的葡萄糖水平。它也可以用于监测葡萄糖转运蛋白。
| 荧光酶标仪 | |
| 激发 | 540纳米 |
| 发射 | 590纳米 |
| 隔断 | 570纳米 |
| 推荐板 | 纯黑色 |
| 成分A：Amplite™红色（光敏） | 1个小瓶 |
| 组分B：测定缓冲液 | 1瓶（50毫升） |
| 成分C：辣根过氧化物酶（HRP） | 1小瓶（10单位） |
| 成分D：葡萄糖氧化酶 | 1瓶（100单位） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
| 成分F：葡萄糖 | 1小瓶（144毫克） |
准备并添加葡萄糖标准品和/或测试样品（50 µL）
准备并添加葡萄糖测定工作溶液（50 µL）
在37°C孵育10-30分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光强度
重要说明
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. Amplite™Red储备液（250X）：
将100 µL DMSO（组分E）添加到Amplite™Red底物（组分A）的小瓶中。储备溶液应及时使用。应将所有剩余的溶液等分，并在-20 o C重新冷冻。注意：避免重复冻融循环。注意：在硫醇（例如二硫苏糖醇（DTT）存在下，Amplite™Red底物不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的测定缓冲液（pH 7.4）。
2.辣根过氧化物酶（HRP）储备溶液（10 U / mL）：
将1毫升测定缓冲液（组分B）加入小瓶辣根过氧化物酶（组分C）。注意：未使用的HRP解决方案应分为一次性使用的等分试样，并保存在-20 o C下。
3.葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
将1 mL的测定缓冲液（组分B）添加到样品瓶中的葡萄糖氧化酶（组分D）中。注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液应分为一次性使用的等分试样，并在-20 o C下储存 。
4.葡萄糖储备溶液（800mM）：
将1 mL测定缓冲液（组分B）添加到葡萄糖瓶（组分F）中。注意：未使用的葡萄糖溶液应分为一次性使用的等分试样，并在-20 o C下储存 。
配制标准溶液
为了方便起见，请使用我们的系列稀释计
通过将适量的800 mM葡萄糖储备溶液稀释到测定缓冲液（组分B）中以产生30 µM的葡萄糖浓度来制备葡萄糖标准液。然后在测定缓冲液（组分B）中进行1：3系列稀释，以得到大约10、3、1、0.3、0.1和0.03 µM系列稀释的葡萄糖标准液。包括非葡萄糖缓冲液对照作为空白对照。
准备工作溶液
表1. 一块透明的底部96孔微孔板（2X）的测定工作溶液
组件 | 体积 |
Amplite™红色储备液（250x） | 20微升 |
HRP储备溶液（10 U / mL） | 100微升 |
葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL） | 100微升 |
分析缓冲液 | 4.78毫升 |
总容积 | 5毫升 |
程序
表2. 黑色96孔微孔板中葡萄糖标准品和测试样品的布局。GS =葡萄糖标准品（GS1-GS7）; BL =空白对照；TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| GS1 | GS1 | ... | ... |
| GS2 | GS2 | ... | ... |
| GS3 | GS3 | ||
| GS4 | GS4 | ||
| GS5 | GS5 | ||
| GS6 | GS6 | ||
| GS7 | GS7 |
表3. 每个孔的试剂组成
| 好 | 体积 | 试剂 |
| GS1-GS7 | 50微升 | 连续稀释（0.03至30µM） |
| BL | 50微升 | 分析缓冲液（化合物B） |
| TS | 50微升 | 测试样本 |
注意：由于Amplite™红色底物（变成非荧光产品）的过氧化，高浓度的葡萄糖（例如，测试样品或标准品中的100 µM）可能导致荧光信号降低。
葡萄糖测定
如表2和3所述，将葡萄糖标准品和含葡萄糖的测试样品添加到96孔固体黑色微孔板中。
在葡萄糖标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL葡萄糖测定工作溶液（表2），使总葡萄糖测定体积为100 µL /孔。 注意： 对于384孔板，将25 µL样品和25 µL测定反应混合物加到每个孔中。
避光保存，在37 o C下将反应孵育10至30分钟 。
使用荧光板读数器在Ex / Em = 530-570 nm / 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm）处监控荧光强度。
40004 Amplite™比色法葡萄糖定量试剂盒 Amplite™ Colorimetric Glucose Quantitation Kit 500 Tests 40005 Amplite™荧光法葡萄糖定量试剂盒 Amplite™ Fluorimetric Glucose Quantitation Kit 500 Tests 40006 Amplite™danguchun定量试剂盒 Amplite™ Cholesterol Quantitation Kit 1 kit 40007 Amplite™danjian定量试剂盒 Amplite™ Choline Quantitation Kit 1 kit
