Power Styramide™信号放大（PSA™）系统是zui灵敏的方法之一，可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与具有更高荧光强度，更高的光稳定性和增强的水溶性的我们的iFluor™染料结合使用，iFluor™染料标记的Styramide™共轭物可以产生比标准ICC /显着更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。 IF / IHC。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide™共轭物具有以更高效率标记靶标的能力，因此产生明显更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比，与相同水平的敏感性相比，Styramide™偶联物还可以显着减少一级抗体的消耗。iFluor™350 PSA试剂盒是基于Alexa Fluor 350酪酰胺的试剂盒或其他光谱相似的荧光酪酰胺或TSA试剂盒的出色替代品。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比，与相同水平的敏感性相比，Styramide™偶联物还可以显着减少一级抗体的消耗。iFluor™350 PSA试剂盒是基于Alexa Fluor 350酪酰胺的试剂盒或其他光谱相似的荧光酪酰胺或TSA试剂盒的出色替代品。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比，与相同水平的敏感性相比，Styramide™偶联物还可以显着减少一级抗体的消耗。iFluor™350 PSA试剂盒是基于Alexa Fluor 350酪酰胺的试剂盒或其他光谱相似的荧光酪酰胺或TSA试剂盒的出色替代品。

1. 修复/透化/阻断细胞或组织

2. 在封闭缓冲液中添加一抗

3. 加入结合HRP的二抗

4. 准备Styramide™工作溶液，并在室温下涂在细胞或组织中5-10分钟

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Styramide™储备溶液（100X）：
   将100 µL DMSO加入iFluor™染料标记的Styramide™共轭物（组分A）的小瓶中，制成100X Styramide™储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ^o C的暗处存储，并避免重复冻融循环。
   

2. H ₂ O ₂溶液（100X）：
   向9 mL的ddH ₂ O中添加1 mL的3％过氧化氢（组分E）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H ₂ O ₂溶液。

准备工作溶液

1. Styramide™工作溶液（1X）：
   每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide™储备溶液和10 µL H ₂ O ₂  储备溶液。注意：根据盖玻片或96孔微孔板中每孔所需的100 µL Styramide™工作溶液，提供的Styramide™足以进行100次测试。注意： 必须在制备后2小时内使用Styramide™工作溶液，并避免直接暴露在光线下。
   

2. 二级抗体-HRP工作溶液：
   在含1％BSA的PBS中以1：100稀释100X二级抗体-HRP储备溶液。注意：  此试剂盒中提供的二抗HRP足以基于100μLHRP工作溶液/盖玻片或96孔微孔板中的每孔进行100次测试。

程序

该方案适用于细胞和组织染色。

细胞固定和通透性

1. 在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
   

2. 用PBS冲洗细胞或组织两次。
   

3. 在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
   

4. 用PBS冲洗细胞或组织两次。

组织固定，脱石蜡和补液

根据标准IHC规程对组织进行脱蜡和脱水处理。根据需要使用特定溶液/协议进行抗原修复。

过氧化物酶标记

1. 可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性。在室温下用PBS冲洗两次。
   

2. 可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过shengwusu封闭缓冲液封闭内源性shengwusu。
   

3. 在4°C下用的封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。
   

4. 除去封闭溶液，并添加在推荐的抗体稀释液中稀释的一抗，在室温下放置60分钟，或在4 ^o C 下放置过夜。
   

5. 用PBS洗涤3次，每次5分钟。
   

6. 将100 µL二级抗体-HRP工作溶液应用于每个样品，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
   

7. 用PBS洗涤3次，每次5分钟。

圣yramide 标签

1. 准备并向每个样品上涂100 µL Styramide™工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短与苯乙烯酰胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育时间。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的苯乙烯酰胺。
   

2. 用PBS冲洗3次。

复染和荧光成像

1. 根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂随附的说明进行操作。
   

2. 使用具有防褪色特性的安装介质安装盖玻片。
   

3. 使用适当的过滤器设置以可视化来自苯乙烯酰胺标签的信号。

表1.建议用于核复染色的产品。