需要danguchun来建立和维持细胞膜。它在生理温度范围内调节膜的流动性。 danguchun也是合成weishengsuD和类固醇激素(包括肾上腺激素pizhichun和醛固酮以及性激素,雌激素及其衍生物)的重要前体分子。该Amplite™danguchun定量分析试剂盒提供了zui灵敏的danguchun定量方法之一。该试剂盒使用Amplite™Red定量danguchun的浓度,这与danguchun存在时danguchun氧化酶介导的酶偶联反应中过氧化氢的产生有关。danguchun的量与在酶偶联反应循环中形成的过氧化氢的浓度成比例。在存在过氧化物酶的情况下,Amplite™Red的荧光强度与过氧化氢的浓度成比例,而过氧化氢的浓度则转换为danguchun的浓度。该测定可以容易地用荧光酶标仪读取。
荧光酶标仪 | |
激发 | 540纳米 |
发射 | 590纳米 |
隔断 | 570纳米 |
推荐板 | 纯黑色 |
成分A:Amplite™红色(光敏) | 1个小瓶 |
组分B:测定缓冲液 | 1瓶(20毫升) |
组分C:danguchun酶混合物(冻干) | 2瓶 |
组分D:danguchun标准 | 1个样品瓶(2 mM,100 µL) |
成分E:DMSO | 1小瓶(200 µL) |
准备danguchun测定工作溶液(50 µL)
添加danguchun标准品和/或测试样品(50 µL)
在37°C孵育30分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光强度
重要 开始实验之前,请在室温下解冻所有试剂盒组件。
库存解决方案的准备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. Amplite™Red储备液(250X)
在Amplite™Red底物(组分A)的小瓶中加入40 µL DMSO(组分E)。储备溶液应及时使用。应将所有剩余的溶液等分,并在-20 o C 重新冷冻。
注意避免重复冻融循环。
注意 在硫醇(例如二硫苏糖醇(DTT))存在下,Amplite™Red底物不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的测定缓冲液(pH 7.4)。
2danguchun标准储备溶液(20 µM)
将10 µLdanguchun标准品(组分D)添加到990 µL测定缓冲液(组分B)中,并充分混合。
标准溶液的制备
danguchun标准
准备danguchun标准液(20 µM)。然后在测定缓冲液(组分B)中进行1:3系列稀释,以得到大约10、3、1、0.3、0.1、0.03和0.01 µM系列稀释的danguchun标准品。包括非danguchun缓冲液对照作为空白对照。
准备工作解决方案
danguchun测定工作溶液
将5 mL测定缓冲液(组分B)添加到danguchun酶混合物(组分C)的瓶中,并充分混合。将20 µL的Amplite Red™储备溶液(250X)加入danguchun酶混合瓶中。
40004 | Amplite™比色法葡萄糖定量试剂盒 | Amplite™ Colorimetric Glucose Quantitation Kit | 500 Tests |
40005 | Amplite™荧光法葡萄糖定量试剂盒 | Amplite™ Fluorimetric Glucose Quantitation Kit | 500 Tests |
40006 | Amplite™danguchun定量试剂盒 | Amplite™ Cholesterol Quantitation Kit | 1 kit |