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bingansuan氨基转移酶（ALT），也称为血清guansuan丙酮酸转氨酶（GPT），是转移酶家族的成员。它催化bingansuan和guansuan之间α-氨基的可逆转移，并且是氨基酸代谢中的重要酶。ALT主要在肝脏中发现，少量在心脏，肌肉和肾脏中发现。在健康受试者中，血清ALT水平较低。但是，当细胞受损时，例如急性和慢性肝炎，梗阻性黄疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能会渗入血流，并且ALT水平会显着升高。因此，测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。Amplite™荧光bingansuan氨基转移酶测定试剂盒提供了快速灵敏的方法来测定各种生物样品中的ALT。ALT催化bingansuan和α-酮戊二酸反应为丙酮酸和guansuan。guansuan产物是通过酶联反应循环产生红色荧光产物来测量的。信号可以通过荧光酶标仪读取。使用Amplite™荧光bingansuan氨基转移酶测定试剂盒，在100 µL反应体积中仅检测到4 mU / mL ALT。该测定法是鲁棒的，并且可以容易地适用于多种应用。使用Amplite™荧光bingansuan氨基转移酶测定试剂盒，在100 µL反应体积中仅检测到4 mU / mL ALT。该测定法是鲁棒的，并且可以容易地适用于多种应用。使用Amplite™荧光bingansuan氨基转移酶测定试剂盒，在100 µL反应体积中仅检测到4 mU / mL ALT。该测定法是鲁棒的，并且可以容易地适用于多种应用。
| 荧光酶标仪 | |
| 激发 | 540纳米 |
| 发射 | 590纳米 |
| 隔断 | 570纳米 |
| 推荐板 | 纯黑色 |
组件
| 组分A：ALT酶混合物 | 1瓶（冻干粉） |
| 组分B：ALT检测缓冲液 | 瓶（10毫升） |
| 成分C：NAD | 1个小瓶 |
| 成分D：ALT阳性对照 | 1小瓶（10 U） |
准备ALT标准或测试样品（50 µL）
加入ALT工作溶液（50 µL）
在37°C下孵育30分钟至60分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加
重要说明
开始实验前，在室温下解冻一瓶成分A和B。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. ALT标准溶液：
将100 µL DPBS加入ALT阳性对照（组分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT储备液。
配制标准溶液
为了方便起见，请使用我们的系列稀释计
将10 µL 100 U / mL ALT标准溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL ALT标准溶液（ALT7）。取1000 mU / mL ALT标准溶液并进行1：3连续稀释，以得到ALT标准品（ALT6-ALT1）的连续稀释液。
准备工作溶液
1. NAD溶液（100X）：
将100 µL ddH2O加入NAD小瓶（组分C）。
2. ALT酶混合物溶液：
将10 mL ALT分析缓冲液（组分B）添加到ALT酶混合物（组分A）瓶中，并充分混合。
3. ALT工作溶液：
将整个小瓶100X NAD溶液（从1开始）添加到ALT酶混合物溶液（从2开始）中，以得到ALT工作溶液。
注意： 此ALT工作溶液足以容纳两个96孔板。它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，并避免暴露在光线下。或者，可以通过将200μLH 2 O添加到组分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物储备溶液，然后通过将储备溶液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD混合来制备ALT工作溶液。按比例求解。
程序
表1.黑色96孔微孔板中ALT标准品和测试样品的布局。ALT = ALT标准（ALT1-ALT7，1至1000 mU / mL）; BL =空白对照；TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| ALT1 | ALT1 | ... | ... |
| ALT2 | ALT2 | ... | ... |
| ALT3 | ALT3 | ||
| ALT4 | ALT4 | ||
| ALT5 | ALT5 | ||
| ALT6 | ALT6 | ||
| ALT7 | ALT7 |
表2.黑色96孔微孔板中的ALT标准品和测试样品的布局。
| 好 | 体积 | 试剂 |
| ALT1-ALT7 | 50微升 | 连续稀释（1至1000 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 含0.1％BSA的DPBS |
| TS | 50微升 | 测试样品 |
根据表1和表2提供的布局，将ALT标准品（ALT），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成黑色的96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL每孔试剂，而不是50 µL。 注意：如果需要，在含0.1％BSA的DPBS缓冲液中将测试样品稀释至适当的浓度范围（按ALT标准指示）。
在ALT标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL ALT工作溶液，以使ALT总测定体积为100 µL /孔。对于384孔微孔板，向每孔中加入25 µL ALT工作溶液，总体积为50 µL /孔。
避光保存，在37°C下孵育反应30分钟至60分钟。注意：空白控件的背景将随着时间而增加。
使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增加。
13802 Amplite™荧光法bingansuan转氨酶检测试剂盒 Amplite™ Fluorimetric Alanine Aminotransferase Assay Kit 200 Tests 13803 Amplite™比色法bingansuan转氨酶检测试剂盒 *蓝色* Amplite™ Colorimetric Alanine Aminotransferase Assay Kit *Blue Color* 200 Tests
