苹果酸(Malic Acid)有L-苹果酸、D-苹果酸和DL-苹果酸3种异构体。最常见的是左旋体L-苹果酸,存在于不成熟的山楂、苹果和葡萄果实的浆汁中。它是三羧酸循环的中间产物,也是苹果酸-天冬氨酸穿梭的重要组成部分,易被人体吸收,因此作为性能优异的食品添加剂和功能性食品,广泛应用于食品、化妆品、医疗和保健品等领域。通过检测苹果酸含量可以定量分析其在啤酒、葡萄酒、奶酪和水果等生产领域的重要作用。
高效液相色谱(HPLC)法是一种常用的苹果酸含量检测方法,也是中国药典2010版规定的操作方法。该方法利用手性站相分离液相色谱在特定条件下将样品中的苹果酸分离开来,然后在特定的检测条件下独立检测苹果酸。
整个检测过程主要包括样品制备和仪器检测两个环节。在样品制备阶段,需要将含苹果酸的水果(如苹果、葡萄等)或药物研究中的样品制成细碎的样品,或提取出含苹果酸的成分。在仪器检测阶段,需要设置合适的色谱条件,包括选择适当的柱子、检测波长、流速、柱温、有机溶剂类型和浓度等。然后将制备好的样品溶液注入色谱柱中,经过乳化、加热等处理,使苹果酸在柱内分离后进入检测器进行检测。最后,利用高效液相色谱仪定量分析得到苹果酸的浓度,并进行数据分析。
高效液相色谱法具有检测灵敏度高、分离效果好、操作简便、数据准确等特点,可以在非常短的时间内完成样品的分离和检测,因此大大提高了检测效率和自动化水平。然而,在检测过程中,需要注意保留时间的偏差,确保其在可接受的范围内。此外,对方法和设备的熟悉程度也会影响检测结果的准确性。