酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较

2022年08月31日 13:53:05人气：2833来源：河南绥净环保科技有限公司

　　粪大肠菌群是总大肠菌群的一部分，又称耐热大肠菌群。生长于人与部分动物体内肠道中，水体中的粪大肠菌群主要来自粪便污染，因此通过测定水中粪大肠菌群的含量，可间接得出水体受粪便污染的情况，在环境监测和卫生防疫方面具有重要意义

　　本文对比三种不同粪大肠菌群的检测方法，通过比较多管发酵法、纸片快速法和酶底物法的检测结果，讨论酶底物法检测粪大肠菌群的可行性及应用。

　　一、检测方法及原理

　　1、多管发酵法

　　将水样接种于乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，在37±0.5℃下培养24±2 h进行初发酵试验，大肠菌群生长繁殖产酸产气，产酸使乳糖蛋白胨培养液中的p H降低，发酵管由紫色变黄色;产气使发酵管中导管产生小气泡，产酸或产气则为阳性，否则为阴性。

　　将显阳性的发酵管接种至EC培养液，在44.5±0.5℃下培养24±2 h进行复发酵，造成不利于自然环境中的大肠杆菌生长的条件，而粪大肠菌群将会在44.5℃下继续存活生长繁殖，由此通过复发酵管中产气情况判定阳性。

　　通过复发酵后显阳性的发酵管数，查询MPN表，通过统计学方法计算出粪大肠菌群浓度。

　　2、纸片快速法

　　通过将水样接种于吸附了溴甲酚紫和2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑 (TTC) 以及乳糖等营养成分的无菌滤纸上，在44.5±0.5℃下培养18～24 h，当粪大肠菌繁殖产酸使溴甲酚紫变黄色，产气使相应的脱氢酶催化底物TTC形成红色的不溶性三苯甲臢 (TTF) ，在黄色背景显示出红色的斑点或红晕，判定粪大肠菌群存在，该接种纸片显阳性，通过查询MPN表计算出相应浓度值。

　　3、酶底物法

　　将已加入培养基的水样混匀与97孔定量盘，置于44.5±0.5℃培养24h，粪大肠菌能在该温度产生β-半乳糖苷酶 (β-D-galactosidase) ，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖 (ONPG) 生成黄色的邻硝基beng酚，通过定量盘大小孔显黄色数查询酶底物法的MPN表，计算出粪大肠菌群的浓度。

　　二、实验步骤

　　根据水样污染程度选择不同的稀释倍数，将水样接种于乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，在37±0.5℃下培养24±2 h进行初发酵试验，产酸产气显阳性;将显阳性的发酵管用3 mm接种环接种至EC培养液，在44.5±0.5℃下培养24±2 h进行复发酵，发酵管内小导管有气泡则显阳性，记录阳性管数，查对应MPN表，计算结果。

　　1、纸片快速法

　　根据水样污染程度，样品按照三个10倍递减的不同接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片。接种水样应均匀滴加在纸片上，纸片充分浸润、吸收水样，用手在聚丙烯塑膜袋外侧轻轻抚平，做好标记。接种后立即放置44.5±0.5℃的培养箱中培养18～24 h后，通过纸片上颜色变化判定阳性纸片数，查询对应MPN表，计算结果。

　　2、酶底物法

　　根据水样受污染程度，进行样品稀释，将商品化酶底物培养基加入100 ml待测样品中，充分混匀，*溶解后全部倒入97孔定量盘中，抚平定量盘背面，赶出气泡，用程控定量封口机封口。放置于44.5±0.5℃的培养箱中培养24 h后于标准阳性比色盘对比，根据阳性孔数查询对应的MPN表，计算结果。

　　三、结果与讨论

　　1、实验结果与数据分析

　　实验开始前对使用的玻璃器皿按要求进行灭菌操作，制备无菌水时检验纯水质量并进行灭菌操作，并开启实验室紫外灯对细菌室灭菌2 h以上。

　　根据方法标准和《水和废水监测分析方法 (第四版) 》要求，分别用灭菌水对每批次样品培养基 (培养纸片) 进行全程序空白和实验室空白检验，均未检出，亦无任何颜色或气泡等明显变化。

　　每次实验均用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌做阳性、阴性对照，且大肠埃希氏菌对照组样品均显阳性，产气肠杆菌对照组均显阴性。

　　绥净已由单一的水质检测仪器发展到多元化系列检测仪器。公司凭借雄厚的自主研发能力，推出的<系列>全参数测定仪可快速检测：便携COD测定仪、便携多参数水质测定仪、CODmn、氨氮、总磷、总氮、浊度、悬浮物、色度、六价铬、总铬、铜、镍、锌、铅、锰、铁、磷酸盐、硫酸盐、硫化物、CN、氟化物、硝酸盐氮、亚硝酸盐、余氯、总氯、二氧化氯、二氧化硅、挥发酚等数十种检测项目，已广泛应用于环保、所、第三方检测、石油化工、光电能源、水产养殖、钣金电镀、油墨涂料、水产养殖、食品加工、生物制药及市政工程等众多行业，受到众多客户一致认可！

　　河南绥净环保科技有限公司，主要生产研发COD测定仪、氨氮快速检测仪、多参数水质测定仪、便携水质检测仪、多功能消解器等水质检测仪器。网站：河南绥净环保科技有限公司。

关键词：环境监测培养箱玻璃器皿水质检测仪器

上一篇：泳池废水的处理方法

下一篇：氨氮检测中你是否碰到了这样的苦恼?又该如何解决?

全年征稿/资讯合作 联系邮箱：hbzhan@vip.qq.com

版权与免责声明: 1、凡本网注明"来源：环保在线"的所有作品，版权均属于环保在线，转载请必须注明环保在线，https://www.hbzhan.com。违反者本网将追究相关法律责任。; 2、企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容，如涉及侵权、违规遭投诉的，一律由发布企业自行承担责任，本网有权删除内容并追溯责任。; 3、本网转载并注明自其它来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。; 4、如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。

河南绥净环保科技有限公司作者

进入展台在线留言

企业直播推荐更多>>

深圳奕帆科技亮相第二十五届上海环博会带来了哪些产品？

产品推荐更多>>