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关于ELISA试剂盒的固相载体原理

2014年08月28日 11:54:50人气:2171来源:上海通蔚生物科技有限公司

  良好的ELISA板应该是吸附机能好,空缺值低。
  
  为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣,可应用如下的试验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定,然后比较结果。可作ELISA中载体的材料良多,zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA试剂盒中用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠,表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。
  
  与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA试剂盒所有单个读数与全部读数的均数之差,应小于10%。其长处是表面积极大,反应在悬液中进行,其速率与液相反应近似。
  
  在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别zui大,这种载体就是这一ELISA测定项目的zui合适的固相载体。小珠的另一特点是更易于使洗涤*,使用特殊的洗涤器,使小珠在洗涤过程中动弹淋洗,其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。ELISA试剂盒常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后,分别测每孔溶液的吸光度。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体,反应后用磁铁的吸引进行分离,洗涤利便,试剂盒一般均配以特殊仪器。
  
  为便于作少量标本的检测,有制成8联孔条或12联孔条的,放入座架后,大小与尺度ELISA板相同。聚苯乙烯经射线照射后,其吸附机能特别是对免疫球蛋白的吸附机能增加,应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多,但用于间接法测抗体时空缺值较大。也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为ELISA试剂盒固相载体的。聚氯乙烯对蛋白质的吸附机能比聚苯乙烯高,但空缺值也略高。聚苯乙烯ELISA板因为原料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大,因此,每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其机能。
  
  ELISA载体的外形主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器,不介入化学反应。板式及珠式ELISA的标本量一般为100-200ul,而小试管可根据需要加大反应体积,标本反应量的增加有助于试验敏感性的进步。ELISA试剂盒现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操纵的尺度化极为有利。
关键词:吸附剂
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