体内细胞培养及其操作步骤

2010年09月04日 15:44:25人气：1465来源：上海瑞齐生物科技有限公司

1．瘤细胞悬液接种

（1）无菌选取生长良好（有光泽，淡红色）瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。

（2）在PBS中将瘤*碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。

（3）培养细胞应用PBS洗两遍。

（4）计数并调整细胞浓度至107～108／ml。

（5）常规消毒后，于接种部位（通常为背部或腋窝腹股沟皮下）用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液（0.1ml／部位，＞106细胞）。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些。

（6）次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，zui后固定为一个相对稳定的时间。

2．腹水瘤的建立与腹水瘤的接种　将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性（含大量红细胞），反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。

（1）将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数。

（2）消毒动物，左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞。

（3）接种腹水瘤细胞后约7~12d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。

（4）抽取的腹水经3000rpm离心15min，收集上清，分装冻存备用。

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