弓形虫病实验室诊断与结果分析

弓形虫病（toxoplasma）是由刚地弓形虫引起的人畜共患的传染病，具有广泛的自然疫源性，很多哺乳动物和鸟类均可罹患此病。弓形虫侵袭人体可导致弓形虫感染和弓形虫病，后者专指有临床表现和活动性感染的病理学改变。人体弓形虫感染多为隐性感染，但抵抗力低下时，则可出现严重的临床症状。先天性感染常致胎儿畸形、死胎及流产。
[病因学] 弓形虫生活史包括有性生殖和无性生殖2个阶段，全过程需两种宿主——终末宿主（猫及猫科动物）和中间宿主（其他动物或人体内）。弓形虫发育全过程有5种不同形态：即滋养体、包囊、裂殖体、配子体和卵囊。
猫食人弓形体卵囊或包囊后，在肠腔分别释放出子孢子和滋养体，并侵入小肠上皮细胞进行裂体增殖，部分裂殖子发育为雌雄配子体，两者结合为合子，发育为卵囊，随猫粪排出体外。
人食人弓形体卵囊或吞食包囊后，在肠内逸出子孢子、缓殖子或速殖子，随即侵入肠壁经血或淋巴进入单核吞噬细胞系统寄生，并扩散至全身各器官组织的实质细胞内繁殖，导致细胞破裂，引起各种急性病症。在免疫功能正常的机体，部分速殖子侵入宿主细胞后，特别是脑、眼、骨骼肌的虫体繁殖速度减慢，并形成包囊，包囊在宿主体内可存活数月、数年，甚至终身不等。当机体免疫功能低下或长期应用免疫抑制药时，组织内的包囊可破裂，释出缓殖子，进入血流和其他新的组织细胞继续发育繁殖。
速殖子期是弓形虫的主要致病阶段，以其对宿主细胞的侵袭力和在有核细胞内*的内二芽殖法增殖破坏宿主细胞。虫体逸出后又重新侵入新的细胞，刺激淋巴细胞、巨噬细胞的浸润，导致组织的急性炎症和坏死。
包囊内缓殖于是引起慢性感染的主要形式，包囊因缓殖子增殖而体积增大，挤压器官，使功能受到障碍。包囊增大到一定程度，可因多种因素而破裂。游离的虫体可刺激机体产生迟发性变态反应，并形成肉芽肿病变，后期的纤维钙化灶多见于脑、眼部等。宿主感染弓形虫后，在正常情况下，可产生有效的保护性免疫，多数无明显症状，当宿主有免疫缺陷或免疫功能低下时才引起弓形虫病，即使在隐性感染，也可导致复发或致死的播散性感染；近几年有报道艾滋病患者因患弓形虫脑炎而致死。
[实验室诊断]
特异性检查
（1）涂片检查。
（2）动物接种分离法。
（3）血清学检查。
（4）分子生物学诊断。
[结果分析与判断]
1．涂片检查 取急性期患者的体液、脑脊液、血液、骨髓、羊水、胸水经离心后，沉淀物作涂片，或采用活组织穿刺物涂片，经姬姆萨染色后，显微镜下检查出弓形虫滋养体即可确诊。此法简便，但阳性率不高、易漏检。此外也可切片用免疫酶或荧光染色法，观察特异性反应，可提高虫体的检出率。
2．动物接种分离法 动物接种分离法或细胞培养法查找滋养体。采用敏感的实验动物小白鼠，样本接种于腹腔内，1周后剖杀取腹腔液显微镜检查，阴性需盲目传代至少3次；样本亦可接种于离体培养的单层有核细胞。动物接种和细胞培养是目前常用的病原查诊方法。
3．血清学检查 由于弓形虫病原学检查存在不足，血清学检查成为广泛应用的诊断手段。方法种类较多，主要有以下4种。
（1）染色试验：为经典的特异血清学方法，采用活滋养体在有致活因子的参与下与样本内特异性抗体作用，使虫体表膜破坏不为着色剂美蓝所染。显微镜检查见虫体不被蓝染者为阳性，虫体多数被蓝染者为阴性。
（2）IHA：此法特异、灵敏、简易，适用于流行病学调查及筛查性抗体检测，应用广泛。
（3）间接免疫荧光抗体试验：以整虫为抗原，采用荧光标记的第2抗体检测特异抗体。此法可测同型及亚型抗体，其中检测IgM适用于临床早期诊断。
（4）ELISA：用于检测宿主的特异循环抗体或抗原，已有多种改良法广泛用于早期急性感染和先天性弓形虫病的诊查，这种方法的灵敏度可检出抗原量为0．5ug/L
4．分子生物学诊断 近年来将PCR及DNA探针技术应用于检测弓形虫感染，更具有灵敏、特异、早期诊断的意义，目前已开始试用于临床。