*残留检验的薄层色谱测定方法

1）试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯为蒸馏水。
1.乙酸乙酯
2.二氯甲烷
3.正己烷
4.三氯甲烷
5.特丁醇
6.甲醇
7.丙酮
8.浓盐酸：密度约1．19g／ml
9.氢氧化钠溶液：10mol／L水溶液
10.荧光胺溶液：30rug荧光胺溶于250ml丙酮中，可用于6～9块展开板
11.二乙胺
12.展开溶剂：三氯甲烷—特丁醇（80+20），当日新配
13.*缓冲液：0．2mol／I水溶液。使用前用10mol／L氢氧化钠溶液调pH值达到12．25（本步骤需在使用前、在20C室温的蒸气浴上进行）。
14.磷酸盐缓冲液：2mol／L水溶液。用2mol／I的磷酸二氢钾与2mol／I。的*合，得到pH为5．25的缓冲溶液。
15.盐酸（1．7mol／L）—磷酸盐缓冲溶液（2mol／L，pH 5．25） （1+1）。
16.磷酸盐缓冲液
17.*标准晶：纯度≥99％。
18.*标准贮备液（1mg／m1）：准确称取100rug*（至0．1mg）于100ml容量瓶中，用丙酮溶解并定容后存放在聚乙烯瓶中，于一10~C保存可使用
一个月。
19.内标贮备液（1mng／ml）：准确称取100mg*（至0．1ing）于100ml容量瓶中，用丙酮溶解并定容后存放在聚乙烯瓶中，于一10C保存可使用一个月。
20.*标准工作液（10／ug／ml）：移取标准储备液lml于100mi容量瓶中，加pH 7．6的缓冲溶液至刻度。
21.内标工作液（10／ug／ml）：移取内标贮备液lml于100ml容量瓶汇中，加pH 7．6的磷酸盐缓冲溶液16.至刻度。
22.内标工作液（2．50ug／ml）：移取内标工作液（10txg／mi）25ml于100ml容量瓶中，用pH 7.6的磷酸盐缓冲溶液⑩稀释至刻度。
23..标准溶液A：含5．00ug／ml的*和2．50ug／mI内标工作液。移取50mL*标准工作液（10ug／ml）和25ml内标工作液（10ug／ml）于100ml容量瓶中，用pH 7．6的磷酸盐缓冲溶液16.稀释至刻度。
24.标准溶液B：含2．50ug／ml*和2．50ug／ml内标工作液。移取25ml标准
溶液A于50ml容量瓶中，用内标工作液（2．50／~g／mi）稀释至刻度。
25.标准溶液C：含1．25ug／ml*和2，50ug／ml内标工作液。移取25ml标准
溶液B于50ml容量瓶中，用内标工作液（2．50ug／ml）稀释至刻度。
（2）测定步骤
①提取 称取约2．5g试样（至0．1g）置于50ml离心管中，加入100,L内标工作液。另称取不含*的空白试样3份，分别加入*标准溶液A、B和C各100FI。（相当于试样中添加*的量分别为o．2mg／kg、0．1mg／kg、0．05rug／kg）。静置15min后，加入25ml乙酸乙酯，搅拌lmin，盖上螺旋盖，于卧式振荡器上以约250r／min振荡20min。于2500r／min离心5min后，将上清液转移到另一50ml离心管中。弃去残渣。
②净化 向上述离心管中加入2ml*缓冲溶液，振荡5min，于2500r／min离心5rain，除去上层有机层。再加2ml磷酸盐缓冲溶液，使pH值达到5．25±0．1[必要时用氢氧化钠溶液（1．0mol／L）或盐酸溶液（1．0mol／L）调节pH）。
加5ml正己烷，振荡5min，于2500r／111111离心5min，弃去上层有机层。加入10ml二氯甲烷，振荡5min，于2500r／rain离心5min（如有乳化时，于3500r／rain离心10min）。将离心管倾斜，*吸除上层水相。注意清除界面处的油脂和杂物。如在水和有机相之间存在凝胶状物，不要除去，以免降低回收率。加10PL二乙胺至二氯甲烷中，于40~C氮气流下，蒸发至近干（切勿蒸干）。蒸发时当二氯甲烷液面降至5ml时，用约2ml二氯甲烷洗涤试管内壁；降至2．5ml时，再洗涤1次；降至1．0～1．5mi时，再洗1次。将残渣溶解在100gL甲醇中，旋转混匀30s，静置，使不溶物沉淀于试管底。溶液供测定用。
③测定
a.薄层色谱扫描条件
光源：氙灯
激发波长410nm；发射波长410nm，或根据不同型号的仪器选择不同的滤光片
激发狭缝与发射狭缝：可根据斑点大小进行调节
检测方式：反射荧光
扫描方式：线性扫描
b.测定 将点样器调至85 C，分别点20ul-样液和加有*及内标物标准液的试液到薄层板上。按下法进行点样：于距薄层板的底边约1．o～1．5cm的底线上，距左边约lcm处开始，每隔lcm顺序点样：样液，标准液（o．10rug／k8），样液，样液，标准液（0．05rug／k8），样液，样液，标准液（o．2mg／k8），样液。共点6个样液。
用甲醇作展开剂，展开薄层板至前沿距甲醇液面达lcm时，取出薄层板置于烘箱（100~C）干燥1rain。然后在盛有三氯甲烷—特丁醇（80+20）混合液的饱和展开槽中展开，至前沿距液面6cm处。取出，置于烘箱（100℃）干燥lmin。
将层析板*浸没于荧光胺溶液l一2s，然后置于室温暗处15—30rain后，在紫外灯下观测，测量各斑点的只f值。在上述色谱条件下，*的兄值约为o．83，磺胺吡症的疋f值约为o．71。然后按上述扫描条件进行薄层扫描。
（3）灵敏度和回收率
本方法的测定低限为20mg／kg。
在0．02～0.20mg／kg添加浓度水平上，回收率范围为89．3％～96．5％