液相色谱仪法测定食品中的合成色素

    合成色素多以苯、甲苯、奈等化工产品为原料制成,经过磺化、消化、卤化等一系列有机反应化合而成，所以几乎所有的合成色素都不能为人体提供营养物质口。但由于合成色素色彩鲜艳、着色力强、稳定性好，价格便宜，深受食品生产商的青睐[2]。  由于合成色素在生物体内转化为有害的衍生物，在一定程度上危害人体健康，危害包括一般毒性、致泻性和致癌性等。很多方法包括前处理只适用于检测基质比较简单的食品15-16,对于一些蛋白质含量高且基质复杂的食品(如:海产品,腌制蔬菜等)却不能准确测定其中的含量，而国家标准GB/T 5009. 35-2003-17方法测定色素，前处理步骤繁琐，费时，成本高。为了方便监测各类不同基质的食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱huo红和赤藓红7种常用色素的含量，本试验建立了同时检测以上7种色素的方法,该方法适用于各类不同基质的食品,适用范围广、准确、操作简便、成本低且重复性好。

一、实验部分
1.仪器与试剂
  LC600B液相色谱仪，配有G131型二极管阵列检测器,南京科捷分析仪器公司;G1316A色谱柱恒温箱;多功能高速离心机，;高性能分散机，
  柠檬黄(0.500 mg/ mL)、日落黄(0.500 mg/ mL)、苋菜红(o.500  mg/mL)、胭脂红(0.500 mg/mL)、新红(0.500mg/mL)、赤藓红(1.000 mg/mL)、诱huo红(1.000mg/mL),均购自国家标准物质中心;甲醇(色谱纯);乙酸铵(进口分析纯);去离子水(由Milli-Q纯化水系统制得)。

2.仪器简介

LC600B液相色谱仪高压恒流泵、SPD600B紫外可见可变波长检测器、SCL600B系统控制器、8725i手动进样阀、反控色谱工作站（内置反控主机）、液相色谱柱、微量进样器、进样支架（进样阀用）、*、溶剂过滤器、混合器。

3.样品处理
称取粉碎混匀后的样品5g于25 mL具塞离心管中,加入10 mL 1%氨水的70%乙醇溶液高速匀浆5min，加入柠檬酸溶液,将pH值调到6~7.置于35 C水浴中超声提取20 min,在4 000 r/min下离心10 min,收集上清液加人1 g聚酰胺吸附，充分搅匀，倒入漏斗进行抽滤，用60 C pH=4的去离子水洗涤3次(15 mL/次),然后用甲醇一甲酸(6 : 4），溶液洗涤3次(15 mL/次),再用水洗涤至中性,用乙醇一氨水一水(7:2: 1,v/v/v)溶液解析2~3次(约15 mL/次),收集解析液，于氮吹仪上60 C吹干，加入2mL.水溶解，溶液经0.45m微孔滤膜过滤后,HPL.C待测。

4.色谱条件
 色谱柱:Agilent Eclipse plus C1s柱(250 mmX4.6 mn.5 um),流动相:D为0.02 mmol/L乙酸氨，C为甲醇。
 梯度程序:0~3.0 min,10%C;3. 0~7.5 min,10%C~65%C;7.5~20.0  min.65%C~98%C;20.0~22.0 min.98%C~10%C;22.0~25.0 min,10%C。
 检测波长254  nm;流速1.0 mL/min;柱温30C;进样量10pL

二、实验结果
1.方法的线性范围及检出限
精密量取1.2.1所述混合标准贮备溶液，逐级稀释成不同浓度的混合标液依次进样分析,在0. 5~20.0 mg/L.质量浓度范围内，以响应峰面积为纵坐标，质量浓度(mg/L)为横坐标,绘制线性曲线。以3倍信噪比时的质量浓度为检出限，测得7种色素的回归方程、相关系数、方法检出限(LOD)见表1。加标冰淇淋样品色谱图如图2所示。

2.实际样品的回收率与精密度
  在上述优化试验条件下，对实际样品进行检测。分别准确称取未检出本底的红茶、冰淇淋、腌制黄瓜以及黄鱼等4个检测样品各5g.进行3个水平的添加回收实验，每个水平做6个平行样品，考察方法的回收率和精密度(表2)。从表2中看出，测定不同食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱huo红和赤藓红的平均回收率为82. 83%~105.39%，变异系数为1. 10%~8.40%.7种色素均可满足定量分析要求。