热稳定肠毒素（ST）的快速检测与鉴定

 

    （1）ELISA检测ST  De．Mai等（1983）以过氧化物酶标记抗体，用抗原竞争间接法检测培养液中STl。定性检测时底物用5—氨基水杨酸，定量时用邻苯二胺。此法与乳鼠试验的相符率为96．7％，无假阳性。‘Thompson等（1984）建立了一种快速ELISA，经提高酶标记抗体浓度和竞争作用温度以及减少底物用量后，可使检测ST的时间缩短至lh。当用单抗时，该法对ST的检出限可达3pg／m1。Klipstein等以人工合成的ST（s）和ST（c）分别与猪IgG偶联后，并制成兔和羊抗ST血清，还以此建立了检测ST的双夹心ELISA。该法*抗体为兔抗ST血清，第二抗体用羊抗ST血清。如用纯化的抗ST（c）抗体作为*抗体、第二抗体，则对ST检测限为140pg／m1，比下降为乳鼠法的1／280，比粗制ST（s）抗体的检测敏感性增高2857倍，对50株人源ST阳性检出率为100％，无一假阳性。本法还可检测猪源ST。

 

    （2）放射免疫法  Giannetla等（1981）以改良的过氧化物酶法标记纯化STl，用抗原竞争法检测待检菌培养上清液中的STl，其检测限为50pg／m1的STl，特异性强，重复性亦好，不同时间测定的误差不大于5％，对STl和胃肠道多肽均无交叉反应。Frant等将猪源菌株431所产的ST与牛血清白蛋白或血蓝蛋白偶联后，制成兔抗ST血清，另以¹²⁵I标记的该菌株ST作为检测标记物，通过待检ST对标记物的竞争抑制来测定样品中ST含量，其检测限达50pg每反应管，整个试验可在一天内完成。此法可检测猪、牛和人源的STl，对IrT及STl均无反应，且对STl的定量与乳鼠法所得的结果呈高度相关。

 

    （3）GMl—ELlSA  Svennerhotm等研制出抗STl的单抗，并以此建立了检测ST的GMl—ELISA。其主要步骤为将ST与CT的B亚单位（CT-B）偶联，再把偶联物结合到用GMl包被的酶标板上，将待检样品和ST标准样品分别稀释后，再各自与抗ST单抗在室温下作用1h，加入上述板孔中，再加入HRP标记的抗鼠免疫球蛋白，显色，测OD值。如待检菌株培养液滤液能≥50％抑制抗ST单抗与GMl—ST-CTB结合反应即判为阳性。通过与阳性反应的ST标准的稀释度做比较还可确定样品中ST的浓度。此法既能检测ST 1a，又可检测STl，对纯化ST的检测限为0．2～0．4ng，其敏感性高于乳鼠试验。但对乳鼠法中呈阳性反应的肠结肠炎耶尔森菌的ST却不起反应。