弓形虫抗体IgM（TOX Ab-IgM）检测

弓形虫抗体IgM（TOX Ab-IgM）检测

[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔表面包被纯化的弓形虫抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在弓形虫抗体可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。zui后加入底物和色原（显色液）。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中弓形虫抗体含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比，读出结果。
[标本准备] 静脉抽血2ml，不抗凝。
[试剂]
1．微孔板
2．样品稀释液
3．HRP-抗人IgM酶结合物
4．阴性对照
5．阳性对照
6．洗涤剂
7．TMB显色液
8．终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤]
1．吸取10ul血清标本加入250u1标本稀释液中，做1：26稀释。
2．吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液（不稀释），加入微孔板内，设空白对照1孔。振荡，混匀，去除孔内液体中气泡，室温环境中孵育20min。
3．弃去孔内液体，用洗涤液洗5次。
4．每孔再加入100t．tl酶联结合物，室温环境中孵育20min。
5．弃去孔中酶联液，用洗涤液洗5次。
6．每孔加入100gl TMB显色液，室温环境中孵育10min。
7．每孔加入100t．tl终止液，终止反应，充分混匀。
8．用酶标仪（波长为450nm）读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
[注意事项]
1．整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定，严防交叉污染。
2．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
3．试剂应保存于2～8℃冰箱，使用前应在室温平衡30min。
4．洗涤时各孔均应加满洗涤液，防止孔内有游离酶未洗净，每次洗板后均应在吸水纸上拍干。
5．血标本应分离出血清保存，2～8℃可保存7d，冷冻保存可至6个月，避免反复冻融。
6．试剂在储存或使用过程中，禁止过热、曝晒或强光。
[正常参考值] 抗—TOX IgM阴性。