金属硫蛋白提取方法的介绍

金属硫蛋白（metallothionein）是由由微生物和植物产生的金属结合蛋白，富含半*的短肽，对多种重金属有高度亲和性。它是分子质量较低，半*残基和金属含量*的蛋白质。与其结合的金属主要是镉、铜和锌，广泛地存在于从微生物到人类各种生物中，其结构高度保守。

对于金属硫蛋白的研究,国内外主要集中在提取、检测以及应用上。由于在实际生产中,主要采用层析法,分离纯化后的金属硫蛋白中还含有其它的杂蛋白,因此本文作者正在进行金属硫蛋白的分子印迹聚合物的研究,使其更好地应用于金属硫蛋白的纯化。

金属硫蛋白在生物进化中高度保守，有四种异构体，MT-Ⅰ和MT-Ⅱ在大多数哺乳动物的内脏器官中广泛存在，尤以肝、肾细胞为主，而且参加其功能调节。MT-Ⅲ分布主要限于中枢神经系统，主要分布于星性胶质细胞（集中于细胞体和突起中），其次为神经元细胞，也有报道称少量分布于生殖细胞、小肠、胃、肾和嗅觉皮质细胞中。MT-Ⅳ主要分布于皮肤、舌、消化道等器官的角质细胞和复层鳞状上皮细胞中。

以下为金属硫蛋白的提取方法介绍：

1、主要试剂：三羟甲基氨基甲烷（简称Tris）；5，5-二硫二（2-硝基苯甲酸）（简称DTNB）；PBS缓冲溶液。

2、动物的处理：参考Onsaka等的方法，给家兔皮下注射ZnSO44次，第1天注射60mg/只（约15mg Zn/kg），第2、4天注射90mg/只，第7天注射120mg/只，第8天处死动物取其内脏。

3、粗制品的制备：

1）称重：将前一夜放-4℃冰箱中解冻的试样拿出来用托盘天平称重，试样重量M，到0.1g；

2）搅碎：将试样用剪刀剪成碎片后，用捣碎机捣约30～50s，捣成匀浆；

3）提取：加入相当于试样重量两倍体积的0.02MTris-HCl，用磁力搅拌器搅约半分钟；

4）变性：加入等体积氯仿：乙醇（0.08：1）变性除杂蛋白，搅拌约5分钟；

5）离心：5000rmp、4℃离心25min，弃沉淀，取上清；

6）热变性：75℃热变性3～5min除杂蛋白；

7）过滤：用冰块速冷后用8层纱布过滤，取清液，静置约2h；

8）离心：8000rmp、4℃离心25min，弃沉淀，取上清，得到匀浆液；

9）层析、冻干：对匀浆液进行层析，然后收集富含MT的层析液进行冻干即得MT粗品。