上海科兴商贸有限公司作者
感受态细胞操作:
1、取-70℃冰冻菌种,用划线法接种细菌于培养皿,做好标记,于37℃培养过夜。
2、第二天,从平板上挑取单个菌落,接种至含有3ml LB培养液的试管中,37℃振荡培养过夜。次日取菌液1ml接种至含有100ml LB培养基的500ml烧瓶中,37℃剧烈震荡培养约2~3小时(200~300r/min)
3、当菌落600nm OD值达到0.3-0.4时,将烧瓶取出放置冰上10~15分钟。在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管中。4℃,4000g离心10分钟。
4、弃上清,将管倒置于干滤纸上1min,吸干残留的培养液。加10ml 0.1M的CaCl2到离心管中,振荡混匀,悬浮菌体,冰浴30分钟。
5、4℃,4000g离心10分钟,弃上清,将管倒置于干滤纸上1min,吸干残留的培养液。加4ml冰预冷的0.1M的CaCl2,重悬浮菌体。每管0.2ml分装,至4℃保存备用,24-48小时内使用效果较好。如果暂时不用,可再保存于-70℃的低温冰箱中。
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