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溶解细菌细胞壁之*的测定

2011年06月14日 09:16:36人气:1548来源:上海永叶生物科技有限公司

*为正常机体免疫防御机制的组成部分,因具有溶解细菌细胞壁的作用而得名。在人体内,它存在于嗜中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞内;也存在于粘膜分泌液中,成为体表防御因素之一。体内多数器官含有一定浓度的*,但肾脏和脾脏的含量较多。单核细胞与巨噬细胞的*位于细胞表面,故其释放活跃,而嗜中性粒细胞的*位于胞浆深层,只在细胞裂解时才释放出来。正常人尿中无*。某些疾病患者血清或体液内的*活性值有显著差别,故测定*日益受到临床重视。

1.原理 根据*能使革兰阳性菌细胞壁溶解,尤其是对腐生菌,如溶壁微球菌(M.1ysodeikticus)zui为敏感,故常以溶解溶壁微球菌为指标,对*的活性值进行测定。常用的方法有琼脂平板法与比浊法。新近还根据免疫扩散法中抗原抗体反应的原理而建立了*免疫测定法,由测酶活性改测酶含量,初步探讨认为此法具有特异、灵敏、准确等优点。现将三种方法分别介绍如下。

2.实验方法
(1)琼脂平板法 用0.067mol/L,pH6.4 PBS将琼脂配成1%浓度,加温溶解后加50mg/100mL溶壁微球菌菌粉混合制成平皿,凝固后打成直径2mm的小孔。分别加*标准应用液及标本20gL,置37℃扩散18h,用卡尺测溶菌区域直径,根据标准液浓度和溶菌环直径用半对数表制成检量线,查标准曲线求检品*活性值。

(2)比浊测定法 取*标准应用液(5、10、15、20、50ug/mL)及标本各0.1mL分加至试管,每管加基质液6mL(溶壁微球菌基质液240mg/L)混匀,置37℃水浴10min,立即混悬,用600mn波长测A值,以溶壁微球菌浊度的变化在标准曲线上查出*的活性
值。

(3)免疫测定法 ①免疫单扩散板制备:将单价特异性兔抗人*抗体加入1%琼脂糖液中(50℃),制成含5%抗血清凝胶板,用打孔器打成直径为3mm的小孔,当天使用;②*免疫测定:将10btL标本加于免疫扩散板的小孔中,保持湿度在室温下反应,当沉淀环达zui大限度后,用带测微计的放大镜读其直径,以直径的平方在标准曲线上查出*的相应浓度;③标准曲线制备:取*lmg溶于0.05mol/L,pH6.4PBSlmL中,配制成5、10、20、40、80、100、200、300/lS/mL 8种浓度,分别加人免疫扩散板小孔中,经反应后,以沉淀环直径的平方为横坐标,*浓度为纵坐标,绘制标准曲线。

3.正常参考值与临床意义 正常人尿液和脑脊液(CSF)中*为0;血清中*正常参考值:比浊法为11.80±2.2mz/L;平板法为20.40±2.70mg/L;免疫测定法为10—40mz/L(X±2S)。由于方法与实验条件不同,测定结果有差别,故各实验室应建立自己的正常参考值。

血清*测定对鉴别各型急性白血病有一定意义。急粒及急单血清*升高;而急淋、急性红白血病降低或正常;经*奏效病情缓解后,*水平可恢复。血清*测定可作为判断局限性肠炎活动性的一个有用的指标,并且有助于判断临床过程的严重程度和对治疗的反应。

尿内*含量增高的原因有:①肾小管损害;②高*血症;③肾组织破坏。临床上测定尿*主要是作为肾小管损害的一个指标,各种原因的肾小管损害都可引起尿*含量增高。肾移植病人定期检查尿*活性十分必要,如移植肾接受良好,则*活性在7d内恢复正常;若尿中过多的*持续存在,必须疑及排斥反应的发生。

细菌性脑膜炎患者CSF*含量远较病毒性脑膜炎患者的含量高,因此,CSF*测定对二者的鉴别有重要意义。此外,CSF*测定对中枢神经系统的原发性或继发性肿瘤有一定辅助诊断价值。


 

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