牛肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒操作说明

牛肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒自备材料：
1.  蒸馏水。
2.  加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.  振荡器及磁力搅拌器等。

试剂的准备：
 
1.   标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
500pg/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul
250pg/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
125pg/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
62.5pg/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
31.2pg/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
15.6pg/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0pg/ml （空白对照） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul

2.   洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

牛肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒操作步骤：
 
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

牛肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒结果判断与分析：
 1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的HBSAG标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的HBSAG含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3、检测值范围： 0-500pg/ml
4、敏感度：1.95pg/ml