125I标记物的鉴定方法

1．放射化学纯度 是指单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于95%。常用的测定方法是利用三氯醋酸将待测样品中（预加白蛋白助沉淀）所有蛋白质沉淀，离心后测定沉淀物（标记物）的放射性并计算其占待测样品总放射性的百分率。该项参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。
2．免疫活性（immunoreactivity） 指制备的标记物与抗体结合的能力。它反映标记过程中被标记物免疫活性受损情况。测定方法是用少量的标记物与过量抗体反应，然后测定标记物与抗体结合部分的放射性，并计算与加人标记物总放射性的百分比，该值越大表示抗原免疫活性受损越少。
3．比放射性（specificradioactivity） 是指单位化学量标记物中所含的放射性强度，也可理解为每分子被标记物平均所结合放射性原子数目，常用Ci/g、mCi/mg或Ci/mmol等单位表示。标记物比放射性较高时，可提高方法的灵敏度（因相同放射性强度时，高比放射性者标记物用量少）；但比放射性过高时，辐射自损伤大，标记物的免疫活性易受影响，且贮存稳定性差。比放射性计算方法有计算法和自身置换法：
（1）.计算法：依据标记反应中放射性核素的利用率（标记率）来计算。
比放射性（uCi/Pg）＝（投入的总放射性X标记率）/被标记物化学量
标记率（核素利用率）＝（标记物总放射性/总投入放射性）X100%
该法计算操作简便易行，但影响因素多，结果欠。
（2）.自身置换法（self-displacement） 该法通过比较标记抗原与标准抗原的免疫活性来测定纯化后标记物的比放射性。方法为：作一条常规RIA标准曲线，其反应系统由抗体（*）、标记抗原（定量）和不同剂量的标准抗原组成；由于标记抗原与标准抗原的分子浓度之和大于抗体的结合容量，标记抗原与抗体的结合率（B/T%）随标准抗原的增加因竞争抑制而减少；同时另作一条标记抗原自身置换曲线，反应系统仅含有抗体和不同剂量的标记抗原，由于抗体*，故标记抗原的结合率也随标记抗原总量的增加而减少，即所谓自身置换。因此，若标记抗原与标准晶抗原具有相同的免疫活性，则上述两条曲线应平行。表明在相同的放射性结合参数（B/T%）水平上，与抗体结合的标准抗原和标记抗原的物质浓度*相同；由此可通过选择不同放射结合水平的标准抗原化学量（以ng/m1或nmol/ml表示）和相应的标记抗原放射性计量（以cpm/ml表示，其中cpm可换算为Ci或nCi），经直线回归即可计算出该标记物的比放射性）。

原文地址:/biotech/Immunity/2009/j81948417.html