DNA片段纯化常会遇到的问题

1、DNA回收率低

A、溶胶液用量过少

准确计算凝胶的重量，按比例加入溶胶液。

B、凝胶块未*融化

加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，如有必要加入更多量的溶胶液。

C、电泳缓冲液使用时间过长，不新鲜

换用新配制的电泳缓冲液。

D、片段过小，<200 bp

加入1倍体积的异丙醇。

E、片段>10kb

加入洗脱液后，将吸附柱置于60℃，温育15分钟后进行离心洗脱。

F、洗脱液使用不正确

洗脱液pH在7.0~8.5之间时洗脱效果，pH过高或者过低，都将显著影响洗脱效率，请使用试剂盒配送的洗脱液进行洗脱（10 mM Tris-HCL，pH8.5），使用ddH2O洗脱时请保证pH值在此范围内。

G、洗脱液加入位置不正确

使用较小洗脱体积洗脱时，洗脱液应加在膜的*。

H、起始产物量低

若初始回收产物的量很低，应先富集，增大起始产物量。

2、未回收到DNA

DNA Wash Buffer中未加入乙醇

加入规定用量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，以防乙醇挥发

3、电泳时，样品飘出点样孔或后续酶反应实验不理想

乙醇残留：洗脱前，应确保乙醇已去除干净，可再次离心，以*去除残留的乙醇后在进行洗脱操作。

4、柱子堵塞

凝胶未*融化：加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，待凝胶*融化，冷却至室温后再过柱。

原文地址:/biotech/exp/molbio/DNA/2011/o81463377.html