蛋白质分离纯化的几种方法

2020年11月20日 14:22:31人气：3591来源：天津市众迈环保设备科技有限公司

　　蛋白质分离纯化的几种方法

　　分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。

　　一、常用的破碎组织细胞的方法有：

　　1.机械破碎法

　　这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。

　　2.渗透破碎法

　　这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。

　　3.反复冻融法

　　生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。

　　4.超声波法

　　使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。

　　5.酶法

　　如用溶菌酶破坏微生物细胞等。

　　二、蛋白质分离纯化抽提

　　通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等)，使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。

　　三、蛋白质粗制品的获得

　　选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：

　　1.等电点沉淀法

　　不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。

　　2.盐析法

　　不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。

关键词：超声波震荡器

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