51Cr释放试验测定NK细胞活性

2012年05月31日 09:00:15人气：2868来源：上海沪宇生物科技有限公司

基本原理

Na₂⁵¹CrO₄能进入到增殖的细胞内，与细胞浆蛋白质牢固地结合。当标记的⁵¹Cr细胞受到损伤或死亡之后，即可释放出⁵¹Cr。⁵¹Cr辐射γ射线，通过测定受损伤或死亡靶细胞释放到上清中的⁵¹Cr，即可计算出NK细胞活性。

试剂及材料

1. 铬酸钠（Na₂⁵¹CrO₄）：⁵¹Cr的物理半寿期为27.72d。

2. 十二烷基硫酸钠（SDS）：用无菌生理盐水配制成2%浓度。

3. 靶细胞：检测人的NK细胞活性常用的靶细胞为体外传代细胞株K562。检测小鼠NK细胞活性常用的靶细胞是YAC-1细胞株。实验时一般采用24～48h培养的靶细胞。

4. 效应细胞：从人外周血（肝素抗凝）分离的单个核细胞或小鼠脾细胞。

5. 含15%NCS的RPMI-1640营养液及淋巴细胞分层液等。

操作方法

1. 靶细胞的制备：取培养24～48h的靶细胞2×10⁶/0.5ml，加入100～200μci51Cr，置37℃水浴90min，每间隔15min振摇一次。然后用含5%NCS的RPMI-1640培养液洗涤三次，除去游离的51Cr。计数活细胞，用*RPMI-1640培养液调整细胞浓度至1×10⁵/ml，如暂时不用，可放置4℃冰箱内保存。同时应检测细胞的51Cr标记率，一般要求标记率>0.1cpm/细胞；

2. 效应细胞的制备：常规方法分离PBMC或小鼠脾细胞，用*RPMI-1640培养液配制成1×10⁷/ml的细胞悬液备用；

3. 效―靶细胞作用：在无菌操作条件下，取效应细胞和靶细胞各0.1ml（E/T=100:1），加入96孔培养板内，每份标本做3复孔。同时设自然释放对照孔（0.1ml靶细胞+0.1ml*RPMI-1640培养液）和zui大释放孔（0.1ml 靶细胞+0.1ml 2%SDS），放置37℃、5%CO₂温箱内孵育4h，取出后用微量移液器吸出各孔上清0.1ml，加于小塑料试管内（勿将细胞吸出），用γ计数仪测量cpm值；

4. 结果计算:根据下式计算⁵¹Cr自然释放率和NK细胞活性:

自然释放对照孔cpm均值

zui大释放对照孔cpm均值

试验孔cpm均值-自然释放对照孔cpm均值

zui大释放对照孔cpm均值

注：一般要求51Cr自然释放率<10％

关键词：移液器

上一篇：单螺杆泵工作原理和应用分析

下一篇：小鼠蛋氨酸（Methionine）ELISA试剂盒说明书

全年征稿/资讯合作 联系邮箱：hbzhan@vip.qq.com

版权与免责声明: 1、凡本网注明"来源：环保在线"的所有作品，版权均属于环保在线，转载请必须注明环保在线，https://www.hbzhan.com。违反者本网将追究相关法律责任。; 2、企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容，如涉及侵权、违规遭投诉的，一律由发布企业自行承担责任，本网有权删除内容并追溯责任。; 3、本网转载并注明自其它来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。; 4、如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。

上海沪宇生物科技有限公司作者

进入展台在线留言

企业直播推荐更多>>

轻松表计20年匠心钻研智能计量表具！

产品推荐更多>>