人γ干扰素ELISA试剂盒 简易操作说明

 

人γ干扰素ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人γ干扰素（IFN-γ）水平。用纯化的人γ干扰素（IFN-γ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素（IFN-γ），再与HRP标记的γ干扰素（IFN-γ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素（IFN-γ）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人γ干扰素（IFN-γ）浓度。

 

 人γ干扰素ELISA试剂盒 操作方法

 

1. 标准品的稀释：人γ干扰素ELISA试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

 

400 ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

200 ng/L  4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

100 ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

50 ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

25 ng/L1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

 

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

 

4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

 

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

 

7. 温育：操作同3。

 

8. 洗涤：操作同5。

 

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

 

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

 

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

检测范围：                                                     

 

10 ng/L -400 ng/L

 

 人γ干扰素ELISA试剂盒 仅用于测定人血清、血浆及相关液体样本中γ干扰素（IFN-γ）含量（Attention:For laboratory use only,Not for drug or other uses）。