博研生物：大鼠羟*（Hyp）试剂盒说明书

【资料简介】

大鼠羟*（Hyp）标本要求  
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
大鼠羟*（Hyp）操作步骤
1.   标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
40µg/L   5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
20µg/L   4 号标准品  150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
10µg/L   3 号标准品  150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
5µg/L   2 号标准品  150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.5µg/L   1 号标准品  150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
 
 
2.   加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 10 µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.   温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。      
4.   配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.   洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。  
7.   温育：操作同 3。
8.   洗涤：操作同 5。
9.   显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.  终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。  测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。

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