动物ELISA试剂盒的操作要点

【资料简介】

    可用作动物ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保留作多次检测，宜少量分装冰存。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。如在冰箱中保留过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA 中可使本底加深。保留血清自采集时就应留意无菌操纵，也可加入适当防腐剂。除特殊情况外，在医学检修中均以血清作为检测标本。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点，珠式、管式及磁性球ELISA，动物ELISA试剂盒均与特殊仪器配合应用，两者均有具体的使用说明，严格遵照划定操纵，必能得出正确的结果。ELISA试验时，注意事项如下：
     1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
    2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：
    (1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
   （2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
    (3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、动物ELISA试剂盒待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。