葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒

【资料简介】

葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒说明书 
分光光度法  50 管/48 样 
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 
测定意义 
GOD （EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、 和植物中， 催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，
是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。 
测定原理 
GOD催化产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧
化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。 
试验中所需的仪器和设备 
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸
馏水 
试剂的组成和配制 
提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂二：液体 8 mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂三：液体 2 mL×1 支，4℃保存； 
样品测定的准备   
组织处理：按照组织质量（g） ：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，
加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 
血清（浆）：直接检测。 
测定步骤 
1、 分光光度计预热 30min以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。 
2、 GOD 检测工作液的配制：用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混匀，待用；
用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 
3、测定前将GOD 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴 10min以上。 
4、在 1mL玻璃比色皿中加入 40μL样本和 960μL工作液，立即混匀并计时，记录 500nm下
20s吸光值 A1和 1min20s后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。 
GOD活力单位的计算 
1、血清（浆）GOD 活力的计算 
单位定义：每 mL血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。  
GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷V样÷T=3333×ΔA 
2、动物组织GOD 活力的计算 
（1）按蛋白浓度计算 
单位定义：每 mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 
GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷(V样×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算 
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒单位定义：每 g组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 
GOD（nmol/min/ g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷（W ×V样÷V样总）÷T=3333×ΔA÷W 
V反总：反应体系总体积， 1×10-3
 L； ε： 氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数， 7.5×103
 L / mol /cm；
d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.04 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；
T：反应时间，1 min；  Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 

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