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ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。1.样品稀释酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。因此,国外检测血清抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应
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酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中zui常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量的酶(如辣根过氧化物酶,简称HRP)国内已有商品供应。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上,宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。一、工作浓度的选择在免疫酶
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1.1基本概念1.1.1质量控制(QuailityControl,Q.C)质量控制是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的。1)确定控制的对象;2)规定控制对象的标准(预期值);3)制定或选择控制方法和手段;3)测量实际数据;4)比较或较对实际数据与预期值之间的差异,并说明产生这一差异的原因。超出预定误差范围,报警系发出信号,反馈通道中断。5)采取行动,解决差异。恢复原状(原标准状态)的手段发挥作用。质量控制主要采用质控图进行。质控图是把某
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小鼠二酰基甘油(DAG/DG)ELISA试剂盒说明书预期应用ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、组织匀浆或其它相关生物液体中DAG含量。实验原理用纯化的DAG抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的DAG抗体、HRP标记的亲和素,经过*洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的DAG呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1、酶标板:一块(
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SYSTEMS®中文说明书UNIONHONEST酶联免疫吸附测试EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________鸡(Chicken)干扰素-y(IFN-y)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理:IFN-Y试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IFN-Y浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标
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SYSTEMS®中文说明书UNIONHONEST酶联免疫吸附测试EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________人(Human)脱氧吡啶酚(DPD)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆试验原理:DPD试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知DPD浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标
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SYSTEMS®中文说明书UNIONHONEST酶联免疫吸附测试EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________兔(Rabbit)神经肽Y(NPY)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理:NPY试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知NPY浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先
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核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗的本质是含有病原体抗原基因的真核表达载体,当它被导入动物机体后,可被动物细胞所摄取并表达病原体的抗原蛋白,从而诱导机体对该蛋白的免疫反应。关于核酸疫苗诱导免疫反应的机理目前了解的还不十分清楚。一般认为核酸疫苗通过肌肉注射或基因枪(一种将DNA吸附于细微的金颗粒表面通过高压气流将DNA导人机体皮下的方式)导入机体