2012 04-18

PCR反应中Taq酶的选择

随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，...

2012 04-13

Feulgen反应实验步骤

标本需经固定后方可染色，Carnoy固定液可按无水乙醇：三氯甲烷：冰醋酸为6：3：1比例配制。固定后石蜡切片即可。尽量不用新鲜组织恒冷箱切片，因胞质中存在的缩醛磷脂会出现非特异染色。若必须使用恒冷箱切...

2012 03-26

转化子DNA的快速鉴定法

快速细胞破碎法实验步骤1、挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2mlLB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。2、取1ml菌液至1.5mlEppendorf管中，9000rpm离心9mi...

2012 03-19

细胞总RNA的提取操作

1.六孔板每孔细胞中加入1mlTrizol，冰上放置5min，枪头吹打。2.将各孔裂解液吸到1.5mlEP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12...

2012 03-06

荧光染料-CFSE活细胞标记

荧光染料CFSE（CFDA-SE），是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂...

2012 02-27

第三代测序技术

如果有人告诉你用显微镜实时观测单分子DNA聚合酶复制DNA，并用它来测序，你一定会认为他异想天开，没有一点生物的sense。我zui初就是这样认为的，然而它不仅可以实现，而且已经实现了！这个就是被称为...

2012 02-20

大肠菌群显色培养基

大肠菌群显色培养基ColiformChromogenicMedium用途：用于快速、准确检测大肠菌群，培养24小时，大肠菌群显蓝绿色肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、...

2012 02-17

磷酸盐缓冲液(PB)的配制

1.A液(0.2M*水溶液)：NaH2PO4?H2O27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。2.B液(0.2M*水溶液)：Na2HPO4?7H2O53.6g(或Na2HPO4?12H2O71.6...

2012 02-17

提高RT-PCR的灵敏度与产物长度

材料和方法1.EppendorfcMasterRTplusPCR系统2.EppendorfPerfectRNAEukaryotic试剂盒3.所有的PCR反应均在EppendorfMastercycle...

2012 02-10

正常小鼠肾间质成纤维细胞的培养技术

实验材料：1.肾组织：取自8周龄健康雌性小鼠；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L*、200mg/L*，pH7.2；3.0.1%明胶：为生长基质成分，在取材前先用它包被培养...

2012 02-02

PCR实验技术指南之污染与对策

PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与*的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。1、污染原因(1)标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时...

2012 01-31

实验仪器器皿中英文对照

很全面的实验仪器器皿中英文对照，可以使用Ctrl+F键来查找，或复制到Word中查找使用。adapter接液管aircondenser空气冷凝管beaker烧杯boilingflask烧瓶boilin...

2011 12-23

基因文库的构建

一个基因文库中应包含的克隆数目与该生物的基因组的大小和被克隆DNA片段的长度有关。原核生物的基因组较小，需要的克隆数也较少；真核生物的基因组较大，克隆数需相应增加，才能包含所有的基因。此外，每一载体D...

2011 12-06

DNA电泳常见问题分析

1请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。胶...

2011 11-09

RNA提取

1、RNA降解A、新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。B、新鲜组织：某些富含内源核...

2011 11-02

*梯度溶液分离动物细胞核

试剂和器材：1.OptiPrepTM（600g*，ρ=1.32g/ml）；2.OptiPrepTM稀释剂（OptiPrepTMdiluent，OD）：150mmol/LKCl、30mmol/LMgCl...

2011 10-24

抗体实验中各种样品选择的条件

一、如何选择合适的一抗请先确定您要检测的种属和使用的实验方法，然后查找相关产品，根据说明书上描述的“适用种属和实验方法”来确定合适的抗体。如果说明书中有明确您要检测的种属和实验方法均经过检测，则您可以...

2011 10-11

MTT实验开始前准备

1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞...

2011 09-19

免疫组化实验方法

一、免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/Immunocytochemistry,ICC）原理免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学...

2011 09-14

DNA片段纯化常会遇到的问题

1、DNA回收率低A、溶胶液用量过少准确计算凝胶的重量，按比例加入溶胶液。B、凝胶块未*融化加入溶胶液后，置于55℃~60℃进行水浴，如有必要加入更多量的溶胶液。C、电泳缓冲液使用时间过长，不新鲜换用...