由于高度纯化的若丹明110(R110)衍生的底物被锁定为内酯构型,因此它们是无色且无荧光的。半胱天冬酶对R110肽的切割产生强荧光的R110,可以在510-530 nm处用488 nm的激发进行荧光检测,这是荧光仪器中zui常用的激发光源。R110衍生的caspase底物可能是zui敏感的指示剂,广泛用于荧光检测各种caspase活性。该R110底物专门针对半胱天冬酶3和7。我们基于R110的底物经过高度纯化,以消除痕量的游离R110,这是HPLC无法检测到的,但会导致显着的测定背景。
重要说明重要的
是要存放在<-15°C下,并且应该存放在阴凉处。
自收到之日起12个月内可以使用。
储备溶液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.(Z-DEVD)2 -R110储备溶液(10 mM):
将65 µL DMSO加入1 mg(Z-DEVD)2 -R110的小瓶中制成10 mM储备溶液。
准备工作溶液
半胱天冬酶3/7分析溶液(2X):
混合50 µL(Z-DEVD)2 -R110储备液(10 mM),100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM)和10 mL Tris Buffer(20 mM) ),pH = 7.4。
程序
- 将等体积的caspase 3/7标准品或样品与2X caspase 3/7分析反应溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。
- 在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光的增加。
13431 Caspase 8荧光底物(Ac-IETD)2-R110 绿 (Ac-IETD)2-R110 1 mg 13433 Caspase 3/7荧光底物 Z-DEVD-ProRed™ 620 红 Z-DEVD-ProRed™ 620 1 mg