一种广泛适用的RNA提取方法

分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础，而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程．现利用硅藻土对RNase的吸附性，结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理，建立了一种广泛适用的RNA提取方法．在富含多糖的玉米胚乳，富含RNase的动物肝脏，多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好，得率高的RNA．RT-PCR实验表明，提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究．硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是异硫氰酸胍法的3倍多．此外， 将分离提取的总RNA经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段RNA，以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环 RT-PCR，结果证明，富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后续实验．