液相色谱仪操作步骤及主要事项

一、液相色谱仪主要操作步骤

1． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。   

2． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。  

3． 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。  

4． 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。   

5． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。   

6． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。   

7． 设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。   

8． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。   

9． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。   

10)． 填写登记本，由负责人签字。

二、液相色谱仪注意事项：

1． 流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2． 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要让液体过柱子。   

3． 所有过柱子的液体均需严格的过滤。  

4． 压力不能太大，不要超过2000 psi

5.  选择高品质的柱子，并注意使用方法；可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同，对品质管理很严格的厂家而言，这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格，即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以，选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子，我们知道，任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用，柱子更易产生变化。因此，应尽量选用pH适用范围大的柱子。在开发新分析方法时，许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变；如此一来，使用旧柱子开发出来的新分析方法，很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。