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1．为了洗脱细菌，将900ul的K91KanTerrific肉汤菌液加入裂解后的细胞，并于室温下孵育20分钟。2．将步骤1所得全部倒入含有9m1四环素浓度为0．2ug/ml的NZY培养基的50m1锥形...
[方法]1．将100ul含有2×1010个PEG—纯化噬菌体颗粒的TBS，等量分加到多孔板各孔中，4℃孵育12小时。2．用PBST洗涤数次，在室温下每孔加250/ll封闭液封闭2小时。3．用封闭液稀释...
[方法]1．用无菌塑料吸嘴挑取一个AmpR噬菌粒菌落（直径大约lmm）并将其转入到0．2mlMicroAmp反应管中，内含20u1洗脱缓冲液。在GeneAmp9600PCR仪中，95℃加热样本10分钟...
天然V区可以被看作是在经历过或未经历过抗原刺激的淋巴细胞中所发现的结构。结果，有些扩增的V基因将会是重排的肝系基因，而另外的则含有B细胞与抗原相遇所诱导产生的突变体。这些基因扩增所用引物可以识别V基因...
从天然V基因中制备噬菌体抗体文库时，有多种不同B细胞（即V基因）来源可供选择。一般而言，可在两种V基因之间做出选择：一种是未经历体细胞突变的V基因[天然的且一般是免疫球蛋白M（1gM）]，一种是发生过...
[器材和试剂]●PCR试剂和设备●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接头的载体●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制用于...
[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制以下PCR反应混合液。配制成2个“反应管”，1个含有V。文库DNA，另1个则含有Vl文库DNA。反应管对照1对照2●scFV接头DNA（100ng/ul）1．0...
[器材和试剂]●用于细菌培养的无菌96孔圆底微量滴定板，如Nune62162（可自VWR购得）●2×TY/amp/glu培养基●含30％甘油的2×TY/amp/glu培养基（2×TY/amp/glu/...
方法]1．按每孔100ul蛋白抗原包被微量滴定板，4℃过夜。PBS中10ug/m1的浓度是包被抗原的标准浓度。但有时需要更高的浓度或者不同的包被缓冲液（比如碳酸盐缓冲液）。2．弃去抗原液并用PBS洗涤...
抗体基因的突变导人可以是随机的，也可以在特异性位点上。随机导人突变zui为简单，而且也不需要推测哪个位点是提高亲和力的*突变位点。随机突变更接近体内的体细胞高突变过程。导人随机突变的一种常用方法是链改...
[方法]1．设计合成含有CDR3随机化序列的VLFOR引物。当然，此引物必须以拟进行亲和力成熟的抗体VL基因作为基础进行设计。本例中，VLCDR3的7个氨基酸被随机化。在每个随机化位点中，保留了大约5...
我们开始先用VLCDR3随机化，是因为它一般比VHCDR3短，更重要的原因是可以在同源结构上建模。VLCDR3随机化技术也较VHCDR3简单一些，这是因为它位于scFv基因的3，端。因此，随机化过程只...
免疫组织化学（1HC）或称免疫细胞化学是一种方法学，根据特异性抗原—抗体反应的原理，检测组织或细胞内的抗原或抗体成分。IHC有一个很长的发展历史，已有半个世纪以上，自Coons创建免疫荧光组化技术以来...
乙醇—超声波还原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml双重蒸馏水。（2）用0．2m01/LK2C03调pH至7．2，再加入lml无水乙醇。...
CAS号：95-14-7中文名称：1,2,3-苯骈三氮唑其他中文名称：1,2,3-苯并三唑；连三氮茚；苯并三氮杂茂；苯并三唑；防锈剂T706；防锈剂706；T406；苯三唑脂肪胺盐；多效油性剂T406...
1）选择适当的Pipetman：不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。P100.5~10P202~20P10020~100P20050~200P1000200...
方法步骤：1）请取六支微量离心管，分别标上A~F。2）以正确使用方法，依下表所列体积吸取不同溶液至各管中。单位ABCDEFSolution130082050180188Solution27001801...
仪器用具：37℃及65℃水浴或恒温槽药品试剂：质体pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（浓?均为10units/μL,Invitrogen）10×Reactio...
仪器用具：微?离心机；冰浴药品试剂：MPI（25mMTris-HCl,pH8.0;10mMEDTA,pH8.0;50mMglucose）MPII新鲜配制（0.2NNaOH;1%SDS;使用前以10NN...
由于RNA聚合酶一般由数个次单元组合而成，早先要在试管内应用RNA聚合酶的转录活性合成RNA并非易事，但这个问题在SP6,T3及T7等噬菌体的RNA聚合酶陸续被发现以后，情况已*改观。这主要是因为这类...
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